Com os objetivos de quantificar, isolar e caracterizar bactérias psicrotróficas contaminantes de leite cru refrigerado, produzido na região da Zona da Mata de Minas Gerais e Sudeste do Rio de Janeiro, foram analisadas amostras de leite coletadas de 20 tanques coletivos e 23 tanques individuais. As contagens de bactérias psicrotróficas nas amostras de leite para os dois tipos de tanques de refrigeração variaram entre 10² e 10(7) Unidades Formadoras de Colônias (UFC) ml-1, porém, um maior número de tanques coletivos apresentou contagens acima de 1 x 10(5) UFC ml-1. Foi verificada a predominância de bactérias psicrotróficas gram-negativas (81,2%), que foram identificadas pelos sistemas API 20E e API 20NE nos gêneros: Aeromonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Burkholderia,Chryseomonas, Enterobacter, Ewingella, Klebsiella, Hafnia, Methylobacterium, Moraxella, Pantoea, Pseudomonas, Serratia, Sphingomonas e Yersinia. As bactérias gram-positivas (18,8%) foram identificadas com API 50 CH, API Coryne e API Staph, nos gêneros: Bacillus, Brevibacterium, Cellum/Microbacterium, Kurthia e Staphylococcus. Os sistemas API utilizados não identificaram todos os isolados bacterianos. Pseudomonas foi o gênero mais isolado e P. fluorescens foi a espécie predominante. A maioria dos isolados bacterianos apresentou atividade proteolítica e/ou lipolítica a temperaturas de refrigeração de 4°C, 7°C e 10°C, evidenciando seu alto potencial de deterioração do leite e dos produtos lácteos. Os resultados ressaltam que maior atenção deve ser dada aos procedimentos que impeçam a contaminação do leite por esses microrganismos.

This study aimed to quantify, isolate and characterize psychrotrophic bacteria from refrigerated raw milk produced at the ‘Mata’ Region of Minas Gerais State and Southeast of Rio de Janeiro State, Brazil. Raw milk samples, were collected at the farms, from 20 collective refrigerated tanks and 23 individual refrigerated tanks. The psychrotrophic bacteria counting ranged from 10² to 10(7) Colony Forming Units (CFU) ml-1 for both types of refrigerated tanks, but most of the collective tanks showed counts higher than 1 x 10(5) CFU ml-1. Predominance of psychrotrophic gram-negative bacteria (81.2%), that were identified by API 20E and API 20NE as belonging to genera: Aeromonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Burkholderia, Chryseomonas, Enterobacter, Ewingella, Klebsiella, Hafnia, Methylobacterium, Moraxella, Pantoea, Pseudomonas, Serratia, Sphingomonas e Yersinia were oserved. The gram-positive bacteria (18.8%), were identified by API 50 CH, API Coryne and API Staph, to genera: Bacillus, Brevibacterium, Cellum/Microbacterium, Kurthia e Staphylococcus. The API systems utilized could not identify all the bacterial isolates. Pseudomonas was the genus most isolated with P. fluorescens as the predominant species. Most of the isolates presented proteolytic and/or lipolytic activity at 4°C, 7°C and 10°C showing high potential for milk and milk products spoilage. The results indicated that more attention must be taken to the procedures necessaries to reduce milk contamination with psychrotrophic bacteria.

Neste estudo, foi comparada a contagem de células somáticas (CCS) de amostras pareadas de leite de 86 cabras pelo método eletrônico (Somacount 300) calibrado com padrão de vaca, com a técnica padrão de contagem microscópica direta utilizando corante pyronina Y - verde de metila. As cabras eram das raças Saanen e Toggenburg de um criatório localizado na Zona da Mata de Minas Gerais. Em complementação, foi avaliado o efeito do conservante Bronopol® no leite de cabras sobre a CCS. Para as 86 amostras de leite sem conservante, a média das leituras de CCS determinadas com o microscópio foi menor e diferiu (p <FONT FACE=Symbol>£</FONT> 0,05) da média de CCS lidas pelo Somacount 300 padronizado com leite de vaca. Porém, a média de leituras de CCS das 86 amostras com Bronopol® lidas no microscópio não apresentou diferença significativa (p>0,05) em relação à obtida com o Somacount 300; e a curva de estimação de CCS no microscópio em função do Somacount foi significativa em nível de 95% com alta correlação, demonstrando a possibilidade de se utilizar o Somacount 300 padronizado com leite de vaca para leituras de CCS de leite de cabras conservado com Bronopol® dentro dos limites de CCS analisados neste estudo.

In this study, there was a comparison of SCC from paired milk samples of 86 goats by the electronic method (Somacount 300) calibrated with cow milk standard, with the pyronin Y-methyl green stain direct microscopic method. The goats were of Saanen and Toggenburg breeds from a farm located at the Zona da Mata of the Minas Gerais State. In addition, was evaluated the effect of Bronopol® on the SCC in goat milk was evaluated. For the unpreserved 86 milk samples, the SCC mean determined with the microscopic method was smaller and differed (p <FONT FACE=Symbol>£</FONT> 0.05) from that obtained with the Somacount 300 calibrated with cow milk. However, the SCC mean of the 86 milk samples with Bronopol® did not differ between the two methods (p>0.05). The estimated SCC curve for the microscopic in function to the Somacount significant with high correlation, demonstrating the possibility of using the Somacount 300 calibrated with cow milk for counting somatic cells in goat milk preserved with Bronopol® within the range of SCC analyzed in this study.

Os testes de produção de acetoína, determinação da atividade da enzima b-galactosidase e utilização anaeróbica do manitol em conjunto com a susceptibilidade à acriflavina foram avaliados para diferenciação de amostras de Staphylococcus coagulase-positivas (SCP) isoladas de mastite bovina. As amostras foram classificadas no gênero Staphylococcus por meio da sensibilidade a furazolidona, resistência à bacitracina, produção de ácido em aerobiose a partir de glicerol na presença de 0,4mg m<IMG SRC="http:/img/fbpe/cr/v32n1/a14img01.gif">-1 de eritromicina e catalase, e foram positivas no teste de coagulase do plasma de coelho em tubos. A susceptibilidade à acriflavina foi testada em placas de ágar Baird Parker e ágar P com 7,0mg m<IMG SRC="http:/img/fbpe/cr/v32n1/a14img01.gif">-1 de acriflavina. Como controle dos testes, foram incluídas cinco amostras coagulase-negativas de S. hyicus isoladas de leite bovino e identificadas pelo sistema API Staph e a amostra de S. aureus ATCC 29213. Trinta e oito das 49 amostras de SCP foram identificadas como S. aureus e 11 como S. hyicus, não sendo identificada nenhuma como S. intermedius. O sistema API Staph foi empregado para confirmar a identificação das amostras coagulase-positivas de S. hyicus, sete amostras de S. aureus negativas no teste de produção de acetoína e quatro negativas na fermentação anaeróbica do manitol. Todas as amostras de S. aureus foram resistentes a acriflavina, enquanto as de S. hyicus foram sensíveis. Concluiu-se que a sensibilidade a acriflavina pode ser empregada juntamente com os testes de coagulase e produção de acetoína na diferenciação de SCP isolados de mastite bovina.

Production of acetoin, acid production from mannitol under anaerobiosis and b-galactosidase activity in addition to acriflavin susceptibility were evaluated to differentiate between coagulase-positive strains of Staphylococcus (CPS) isolated from bovine mastitis. The strains were classified in the genus Staphylococcus by means of sensitivity to furazolidone, resistance to bacitracin, aerobic acid from glycerol in the presence of 0.4mg m<IMG SRC="http:/img/fbpe/cr/v32n1/a14img01.gif">-1 of eritromicin, catalase, and coagulated rabbit plasma by the tube test. The acriflavin susceptibility was tested on Baird Parker and P agar plates containing 7mg m<IMG SRC="http:/img/fbpe/cr/v32n1/a14img01.gif">-1 of acriflavin. Five coagulase-negative S. hyicus strains identified by the API Staph system and S. aureus ATCC 29213 were used as test controls. Thirty-eight out of the 49 CPS were identified as S. aureus and 11 as S. hyicus, while S. intermedius was not found. The API Staph system was used to confirm the identification of the coagulase-positive strains of S. hyicus, seven S. aureus strains not producing acetoin and four negative for anaerobic fermentation of mannitol. All the strains identified as S. aureus were resistant to acriflavin whereas S. hyicus were sensitive. It was concluded that the sensitivity to acriflavin can be used in addition to the tests of coagulase and acetoin production to differentiate CPS isolated from bovine mastitis.

A pele da teta é uma das principais fontes de contaminação microbiana do leite cru, além de ser uma fonte de infecção da glândula mamária. Este estudo comparou diferentes métodos de preparação do úbere, incluindo a participação do bezerro para estimular a descida do leite, em relação à contaminação microbiana da pele da teta. Um experimento com 36 vacas ordenhadas mecanicamente foi conduzido para comparar três procedimentos (A, B, C) de preparação do úbere. Duas tetas de cada vaca foram amostradas para contagem total de bactérias (CTB) e de coliformes, antes e após lavagem com água e secagem com papel toalha descartável (A); procedimento A, mais imersão das tetas em solução de iodo (4.000ppm) e secagem com papel toalha descartável (B); higienização com toalha de papel embebida em solução desinfetante contendo clorexidina (C). O segundo experimento incluiu 16 vacas ordenhadas manualmente, na presença do bezerro. Permitiu-se a cada bezerro mamar as quatro tetas por alguns segundos, de acordo com o manejo do rebanho. Amostras para bacteriologia de duas tetas de cada vaca foram coletadas, antes, após a mamada do bezerro, e após higienização semelhante ao procedimento C, citado acima. Os tratamentos foram analisados usando-se o teste não- paramétrico de Kruskal-Wallis, considerando-se os dados de tCTB após o uso de um dos métodos de preparação do úbere ou da mamada do bezerro. Usou-se a transformação das contagens bacterianas para a escala logarítmica em base 10, com a fórmula tCTB=log10(CTB+0,5). Para os grupos A, B e C (primeiro experimento), os valores médios de diminuição de tCTB foram 1,8, 2,2 e 2,4, respectivamente. No segundo experimento, as CTB's aumentaram significativamente (P<0,05) de 3,2 para 4,3 após a mamada do bezerro, mas houve uma redução (P<0,01) de mais de dez vezes após a aplicação do desinfetante (2,0). Os resultados indicaram que: (a) lavagem das tetas com água seguida de secagem com papel toalha reduz o número de microrganismos da superfície das tetas, mas a redução é muito maior quando se emprega um desinfetante; (b) a mamada do bezerro antes da ordenha aumenta em mais de dez vezes o número de bactérias na superfície das tetas; (c) o número de bactérias na pele das tetas pode ser reduzido em mais de 90% após a mamada do bezerro, se as tetas forem cuidadosamente desinfetadas. Nas condições dos experimentos realizados, a presença de coliformes foi insignificante.

The teat skin is one of the main sources of microbial contamination of raw milk as well as a source of mastitis infection. This study assessed the microbial load of the teat skin following the application of the different practices for preparing the udder, including the use of calf suckling to stimulate the letdown of milk. Thirty-six cows milked by machine were included in one experiment. Two teats of each cow were sampled for bacteriology before and after using one of three methods of udder preparation, as follows: rinsing with water and drying with single paper towels (A); method A plus pre-dipping with an iodine teat dip (4,000ppm) and drying with single paper towels (B); wiping teats using a commercial wet non-woven wipe pre-soaked with a solution containing chlorexidine (C). The second experiment included 16 cows milked by hand. The calf of each cow was allowed to suck the four teats for a few seconds, and then two teats per cow were sampled for bacteriology. Samples were collected before, after calf sucking and following teat pre-milking treatment (as for group C, above). Statistical analysis was conducted on transformed (log10) data with tTBC=log10(TBC+0.5) using a Kruskal-Wallis test. Each treatment was analysed considering the difference in tTBC after the use of either method of preparation of the udder or calf sucking. For groups A, B and C (first experiment), tTBC values were reduced 1.8, 2.2 and 2.4, respectively. In the second experiment, tTBC increased significantly (P<0,05) after calf sucking (from 3.2 to 4.3). After disinfection the tTBC was significantly reduced to 2.0. These results show that: (a) teat rinsing with water and wiping dry reduces the number of microorganisms on the teat skin, but the reduction is significantly higher when teats are disinfected; (b) calf sucking before milking increases significantly the number of microorganisms on teat skin; (c) the number of microorganisms on teat skin can be reduced more than 10 times after calf sucking if teats are disinfected. Very low numbers or no growth of coliforms were observed in all cases.

O "California Mastitis Test" (CMT) estima o conteúdo de células somáticas no leite e é interpretado subjetivamente, estabelecendo-se escores que, na maioria dos casos, variam de 1 a 5. O escore 1 indica uma reação completamente negativa e os de 2-5 indicam graus crescentes de resposta inflamatória do úbere, sendo normalmente considerados como indicativos de mastite subclínica. Dependendo da interpretação dos escores, o CMT pode produzir resultados falso-positivos ou falso-negativos. Esse trabalho teve o objetivo de avaliar a sensibilidade e a especificidade do CMT em relação à contagem de células somáticas (CCS). Foram utilizadas 3.012 amostras de leite provenientes de 760 vacas Holandesas ou mestiças Holandês-Zebu, pertencentes a 15 rebanhos. Todas as amostras foram submetidas ao CMT e processadas para CCS em equipamento Fossomatic 90. Os valores médios de CCS (x 1.000 células/ml) obtidos para os escores de CMT foram 1 (79,9), 2 (333,5), 3 (670,3), 4 (1.354,0) e 5 (4.455,6). Três opções de interpretação (doente/não-doente) para o CMT foram testadas, em relação aos valores de CCS, iniciando com 100.000 células/ml: (a) 1 versus 2, 3, 4, e 5; (b) 1 e 2 versus 3, 4 e 5; (c) 1, 2, 3 versus 4 e 5. As sensibilidades do CMT em identificar corretamente quartos mamários acima de 200.000 células/ml foram 79%, 61% e 34%, para as opções a, b e c, respectivamente. Para identificar corretamente contagens acima de 500.000 células/ml, as sensibilidades do CMT, para as opções a, b e c, foram, respectivamente: 93%, 82% e 54%. A sensibilidade do CMT em identificar quartos mamários com mastite subclínica foi adequada (acima de 80%) quando a interpretação do teste foi mais rigorosa (opções a e b). A interpretação da reação 3 como negativa (opção c) só alcançou sensibilidade de 80% para contagens entre 1.200.000 e 1.400.000 células/ml. As especificidades do CMT, para CCS de 200.000 e 500.000 foram, respectivamente, 90% e 80% (opção a), 97% e 90% (opção b) e 99% e 97% (opção c).

The California Mastitis Test (CMT) is a simple and widely used diagnostic tool for subclinical mastitis. It is used even in areas where laboratory facilities are available for diagnosis and monitoring program purposes. CMT usually score 1-5, where 1 indicates a completely negative reaction and 2-5 increasing degrees of inflammatory reaction of the udder. The reactions 2-5, 3-5 or 4-5 may be considered as indicative of subclinical mastitis, bever, may produce either false-positive or false-negative results. The aim of this study waecause they are related to an increase of the somatic cell count (SCC) in the milk. This variation, hows to assess the sensitivity and specificity of the CMT in comparison with SCC. A total of 3,012 quarter milk samples from 760 lactating cows were examined. CMT was evaluated at the moment of sampling at cow side and SCC in the laboratory, with a fluoro-opto-electronic method (Fossomatic 90). The average CCS (x 1,000 cells/ml) for CMT scores were: 1 (79.9), 2 (333.5), 3 (670.3), 4 (1,354.0) and 5 (4,455.6). Three options for CMT interpretation were evaluated in relation to a range of CCS, starting from 100,000 cells/ml: (a) 1 versus 2, 3, 4, and 5; (b) 1 and 2 versus 3, 4 and 5; and (c) 1, 2 and 3 versus 4 and 5. The sensitivities of CMT scoring to detect quarters with SCC >200,000/ml were 79%, 61% e 34% for options a, b and c, respectively. The sensitivities of CMT scores for SCC >500,000/ml for options a, b and c, were, respectively, 93%, 82% e 54%. The sensitivity of CMT scores to identify subclinical mastitis was satisfactory (above 80%) when options b and c were used. The interpretation of CMT score 3 as negative for subclinical mastitis was considered as adequate (sensitivity around 80%) only when CCS ranged between 1,200,000 and 1,400,000 cells/ml. The specificities of CMT scoring for CCS of 200,000 and 500,000 were, respectively, 90% and 80% (option a), 97% and 90% (option b) and 99% and 97% (option c).

O objetivo deste trabalho foi caracterizar amostras não hemolíticas de bactérias do gênero Haemophilus isoladas de suínos. As bactérias foram isoladas de material clínico de animais com suspeita da doença de Glässer, de leitões aparentemente sadios provenientes de quatro rebanhos com suspeita clínica desta doença e de casos de poliartrites. Além das características culturais e morfotintoriais, foram utilizados os seguintes testes para a identificação: dependência de NAD(fator V), CAMP, produção de hemolisina, indol, urease e catalase, redução do nitrato e produção de ácido dos carboidratos: glicose, sacarose, arabinose e manose. Dezessete dentre 24 amostras foram classificadas como Haemophilus parasuis (dez isoladas de animais clinicamente doentes e sete de leitões normais). Cinco destas amostras foram classificadas nos sorogrupos 2, 4, 7, ND4 e uma foi não tipável. Quatro das 24 amostras apresentaram características do grupo taxonômico C (teste de arabinose positivo) e três produziram urease. Os testes realizados não permitiram distinguir as amostras urease positivas do gênero Haemophilus das amostras não hemolíticas de Actinobacilius pleuropneumoniae. Mais de 60% das amostras apresentaram sensibilidade in vitro a: ampicilina, cefalotina, cloranfenicol, danofioxacina, nitrofurantoína, penicilina G, polimixina B e tetraciclina.

The aim of this work was to characterize non haemolytic strains of the genus Haemophilus isolated from pigs. The strains were either isolated from pigs with Glässer's disease or from apparently healthy piglets, from four herds supposediy affected by the disease and from pigs with poliarthritis. The strains were characterized by dependence on NAD (V factor), CAMP test, hemolysin, indole, urease and catalase production, nitrate reduction and acid production from glucose, sucrose, arabinose and mannose. Seventeen out of the 24 strains were classified as Haemophilus parasuis (10 isolates from clinically affected animals and seven from healthy piglets). Five of these strains were identified as serovars 2, 4, 7, ND4 and one was nontypeable. Four out of the 24 strains produced acid from arabinose and were tentativelly allocated on taxonomic group C. Three strains produced urease, but the tests did not accuratelly differenciate them from Actinobacilius pleuropneumoniae. In vitro antimicrobial susceptibility test showed that more than 60% of the strains were sensitive to: ampicillin, cephalothin, chloramphenicol, danofioxacin, nitrofurantoin, penicillin, polymyxin B and tetracycline.