Um método rápido por cromatografia líquida foi desenvolvido para a determinação simultânea de omeprazol (OMZ), 5-hidroxiomeprazol (5-HOMZ) e omeprazol sulfona (OMZ SUL) em meio de cultura líquido, para aplicação em estudos de biotransformação empregando fungos fitopatogênicos e endofíticos. A separação foi realizada empregando uma coluna monolítica Chromolith Fast gradient RP 18 com a fase móvel constituída por ácido trifluoroacético (TFA) 0,15% (v/v) em água (solvente A) e TFA 0,15% (v/v) em acetonitrila (solvente B). Foi empregado um gradiente linear de 5 a 90% de B em 1 minuto, vazão de 1,0 mL min-1, temperatura de 30 ºC e detecção em 220 nm. A extração líquido-líquido foi empregada na preparação das amostras, com recuperações na faixa de 62,3-76,6% para todos os analitos. O método foi linear na faixa de 0,2-10,0 µg mL-1 (r ≥ 0,995). Os valores de precisão e exatidão intra- e inter-dias (coeficiente de variação e erro relativo) foram inferiores a 15% para todos os analitos. O método validado foi utilizado para avaliar a biotransformação do OMZ em seus principais metabólitos humanos pelos fungos selecionados. Em geral, os fungos fitopatogênicos foram mais eficientes para biotransformar o OMZ. A reação de sulfonação foi mais prevalente em todos os fungos estudados

A fast liquid chromatography method was developed and validated for the simultaneous determination of omeprazole (OMZ), 5-hydroxyomeprazole (5-HOMZ) and omeprazole sulphone (OMZ SUL) in liquid culture medium for application in biotransformation studies employing phytopathogenic and endophytic fungi. The separation was achieved using a monolithic Chromolith Fast gradient RP 18 endcapped column, using a mobile phase consisting of 0.15% (v/v) trifluoroacetid acid (TFA) in water (solvent A) and 0.15% (v/v) TFA in acetonitrile (solvent B), under linear gradient of 5 to 90% of B in 1 min, flow rate of 1.0 mL min-1, temperature at 30 ºC and detection at 220 nm. Sample preparation was performed by liquid-liquid extraction, with recoveries in the range of 62.3 to 76.6% for all analytes. The method was linear in the range of 0.2 to 10.0 µg mL-1 (r ≥ 0.995). The values for intra- and inter-day precision (% coefficient of variation) and accuracy (% relative error) were < 15% for all analytes. The validated method was used to evaluate OMZ biotransformation to their mammalian metabolites by selected fungi. In general, the phytopathogenic fungi studied were more efficient to biotransform OMZ. The sulfonation reaction was more prevalent for all studied fungi.

Foram descritos métodos analíticos empregando cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS-MS) para a determinação de ametrina em água superficial, sedimento de rio e no molusco bivalve Corbicula fluminea. A técnica de extração líquido-líquido foi utilizada para a preparação das amostras. As análises das amostras foram feitas em coluna RP-18 de fase reversa com detecção no modo electrospray positivo e Multi Reaction Monitoring (MRM). O limite de quantificação de ametrina foi 20 ng L-1, 0,1 ng g-1 e 0,5 ng g-1 para amostras de água, sedimento e bivalves, respectivamente. Na etapa de validação dos métodos foram avaliadas também a linearidade, a precisão, a exatidão e a recuperação. Os resultados obtidos na validação do método estão de acordo com os limites internacionais e com a literatura, sugerindo que o método desenvolvido é adequado para a quantificação de ametrina em amostras de água superficial, sedimento de rio e nos bivalves Corbicula fluminea. Estes métodos foram aplicados na análise de amostras coletadas no Rio Mogi-Guaçu e Rio Pardo, São Paulo, Brasil. O nível mais elevado de ametrina foi 1,44 ng g-1, encontrado nas amostras de bivalves do Rio Mogi-Guaçu.

Analytical methods employing liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS-MS) for ametryn determination in river water, river sediment and in freshwater bivalve mussel Corbicula fluminea are described. Liquid-liquid extraction was used for sample preparation. The analyses of ametryn in samples were performed on a reversed-phase RP-18 column with MS detection in positive electrospray and multi reaction monitoring modes. The quantitation limit of ametryn was 20 ng L-1, 0.1 ng g-1 and 0.5 ng g-1, for water, sediment and bivalve samples, respectively. Linearity, precision, accuracy and recovery were also reported. The results obtained for method validation are within the international limits and in accordance with literature, suggesting that the developed methods are suitable for the quantitation of ametryn in river water, river sediment and in bivalve Corbicula fluminea. These methods were applied for the analysis of samples from Mogi-Guaçu River and Pardo River, São Paulo State. Results indicated that the highest level of ametryn was 1.44 ng g-1 in bivalve samples from Mogi-Guaçu River.

O tirosol é provavelmente uma molécula sinalizadora em fungos endofíticos. A análise do tirosol em cultura líquida Czapek de fungo endofítico foi realizada através de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector por arranjo de diodos. As análises foram obtidas em sistema de fase móvel utilizando gradiente, modo linear, iniciando em acetonitrila/água (1:9 v/v) e terminando em acetonitrila 100% em 30 minutos com vazão de 1 mL min-1. Coluna analítica ZORBAX® ODS (250 × 4,6 mm, 5 μm) à 25 ºC foi utilizada. Extração líquido-líquido de 0,5 mL do meio (pH 7,0) com acetato de etila e injeção de 20 μL após concentração do solvente sob ar comprimido originou bons resultados. Os parâmetros validados foram: linearidade 0,0125-5,0 μg mL-1 (r = 0,9967), limite de quantificação 0,0125 μg mL-1 obtidos pela média das análises; %CV (precisão) e %E (exatidão) com valores abaixo de 15% e recuperação de cerca de 80%. Além disso, o método desenvolvido apresentou valores de validação satisfatórios demonstrando eficiência na análise do tirosol em meio líquido Czapek.

Tyrosol is a possible quorum sensing molecule in endophytic fungi. High-performance liquid chromatography (HPLC) coupled with diode array detector (DAD) was used for the analysis of tyrosol in liquid Czapek fungal cultures. The optimized conditions were gradient mobile phase, in linear mode, consisting initially of acetonitrile/water (1:9 v/v) and increasing up to acetonitrile (100%) in 30 minutes at a flow rate of 1 mL min-1. The column used was a ZORBAX® ODS (250 × 4.6 mm, 5 μm) at 25 ºC. Liquid-liquid extraction of 0.5 mL medium (pH 7.0) with ethyl acetate and injection of 20 μL after solvent evaporation under air flow gave good results. Some validation parameters obtained were: linearity 0.0125-5.0 μg mL-1 medium (r = 0.9967), quantification limit of 0.0125 μg mL-1 medium, %CV (precision) and %E (accuracy) bellow 15% and recovery around 80%. Therefore, the developed method presented satisfactory validation parameters and it was efficient for the analysis of tyrosol in Czapek medium.

Foram desenvolvidos dois métodos sensíveis e simples baseados em cromatografia líquida de alta eficiência e eletroforese capilar (EC) para a análise enantiosseletiva de omeprazol em formulações. O omeprazol racêmico e (S)-omeprazol foram extraídos de comprimidos disponíveis comercialmente usando metanol:NaOH 2,5 mol L-1 (90:10, v/v). A separação quiral do omeprazol por HPLC foi obtida empregando a coluna CHIRALPAK AD, fase móvel composta por hexano:etanol (40:60, v/v) e detecção em 302 nm. A resolução dos enantiômeros do omeprazol por EC foi obtida empregando beta-ciclodextrina sulfatada (3% em tampão fosfato, 20 mmol L-1, pH 4.0) e detecção em 202 nm.

We developed two sensitive and simple assay procedures based on high- performance liquid chromatography and capillary electrophoresis (CE) for the enantioselective analysis of omeprazole in pharmaceutical formulations. Rac-omeprazole and (S)-omeprazole were extracted from commercially available tablets using methanol:NaOH 2.5 mol L-1 (90:10, v/v). Chiral HPLC separation of omeprazole was obtained on a CHIRALPAK AD column using hexane:ethanol (40:60, v/v) as the mobile phase and detection at 302 nm. The resolution of omeprazole enantiomers by CE was carried out using 3% sulfated beta-cyclodextrin in 20 mmol L-1 phosphate buffer, pH 4.0 and detection at 202 nm.

Neste artigo estamos relatando a aplicação da cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (LC-MS-MS) para a identificação dos produtos formados na oxidação de albendazol e disopiramida utilizando metaloporfirinas em dicloroetano como catalisador e iodozilbenzeno como doador de oxigênio. Nossos resultados comprovam que LC-MS-MS é uma poderosa técnica para o estudo in vitro de metabolismo de fármacos, permitindo a identificação de metabólitos conhecidos ou não. Foi observado que o sistema catalítico usado resultou na formação dos mesmos metabólitos obtidos in vivo, embora outros produtos também foram formados na oxidação da disopiramida.

In this paper we report the application of liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS-MS) to the identification of the products formed by oxidation of albendazole and disopyramide with metalloporphyrins in dichloroethane, using iodosylbenzene as an oxygen donor. Our results show that LC-MS-MS is a powerful tool to study the in vitro metabolism of drugs, allowing the identification of known and unknown metabolites. In addition, it was observed that the catalyst system used resulted in the formation of the same metabolites as obtained in vivo, although for disopyramide other products were also observed.

Várias fases estacionárias baseadas em derivados de polissacarídeos e proteínas foram avaliadas para a resolução de alguns fármacos quirais e seus metabólitos. As fases estacionárias baseadas em polissacarídeos CHIRALCEL OD-H, CHIRALCEL OB-H, CHIRALCEL OJ, CHIRALPAK AD e CHIRALPAK AS foram avaliadas em condições de fase normal, usando hexano:2-propanol como fase móvel. Dietilamina ou ácido trifluoracético foram adicionados para melhorar a simetria dos picos. As colunas CHIRALCEL OJ-R, CHIRALCEL OD-R e CHIRALCEL OD-H foram avaliadas em condições de fase reversa, usando acetonitrila:água ou acetonitrila: NaClO4 . As fases estacionárias baseadas em proteínas CHIRAL AGP e ULTRON ES-OVM foram usadas com fases móveis consistindo de soluções tampão adicionadas de modificadores orgânicos. Entre as fases estacionárias baseadas em derivados de polissacarídeos, a CHIRALPAK AD mostrou melhor resolução de quase todos os fármacos e metabólitos estudados. A coluna ULTRON ES-OVM foi particularmente útil para a resolução dos quatro estereoisômeros da tioridazina-2-sulfóxido.

Several chiral stationary phases based on polysaccharide derivatives and proteins were evaluated for the resolution of some chiral drugs and their metabolites. The polysaccharide-based stationary phases CHIRALCEL OD-H, CHIRALCEL OB-H, CHIRALCEL OJ, CHIRALPAK AD and CHIRALPAK AS were evaluated under normal phase conditions, using hexane:2-propanol or hexane:ethanol as mobile phase. Diethylamine and trifluoracetic acid were also added to improve peak shape. The CHIRALCEL OJ-R, CHIRALCEL OD-R and CHIRALCEL OD-H columns were evaluated under reversed-phase conditions, using acetonitrile:H2O or acetonitrile:NaClO4 solution. The protein- based stationary phases, CHIRAL AGP and ULTRON ES-OVM columns were used with mobile phases consisting of a buffer solution supplemented with an organic modifier. Among the polysaccharide-based stationary phases, CHIRALPAK AD provided better resolution for almost all drugs and metabolites studied. The ULTRON ES-OVM column was particularly suitable for the resolution of the four enantiomers of thioridazine-2-sulfoxide.