Acute intermittent porphyria (AIP, OMIM 176000) is an autosomal dominant metabolic disease caused by mutations in the gene encoding hydroxymethylbilane synthase (HMBS; EC 4.3.1.8; formely named porphobilinogen deaminase, PBGD), mapped to chromosome 11q23.3. We describe a novel mutation of the HMBS gene, a de novo 3-base deletion in the splicing donor site of intron 3 (IVS3+2_4delTGG) in a woman affected by AIP. RT-PCR analysis revealed an abnormal HMBS mRNA, compatible with exon 3 skipping.

CONTEXTO E OBJETIVO: A enzima aspartato aminotransferase apresenta o piridoxal fosfato como coenzima, oriunda da piridoxina existente em alimentos vegetais frescos. A anemia sideroblástica responsiva à vitamina B6, mielofibrose e síndrome de Peyronie respondem a altas doses de piridoxina. O objetivo foi investigar a máxima resposta da aspartato aminotransferase à suplementação oral com piridoxina. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Experimento controlado, na Seção de Hematologia, Instituto Adolfo Lutz. MÉTODOS: A atividade da aspartato aminotransferase eritrocitária foi determinada (antes e após) em voluntários que receberam suplementação por 15-18 dias (30 mg, 100 mg e 200 mg diariamente). Estudo in vitro também foi realizado, com sangue de sete indivíduos. As atividades enzimáticas antes e após a incubação foram determinadas, seguindo o mesmo protocolo do estudo in vivo. RESULTADOS: O estudo in vivo revelou um aumento gradativo da saturação da aspartato aminotransferase com doses crescentes de piridoxina. 83% de saturação foi alcançada com 30 mg diariamente, 88% com 100 mg e 93% com 200 mg. O estudo in vitro não revelou saturação de 100%. CONCLUSÕES: Tanto in vivo quanto in vitro, não se revelou saturação completa da aspartato aminotransferase por sua coenzima piridoxal-5-fosfato nos eritrócitos. Entretanto, a dose de 200 mg diariamente poderia ser empregada com segurança no tratamento da anemia sideroblástica, mielofibrose e síndrome de Peyronie. Embora a saturação máxima nos eritrócitos não seja atingida, os eritroblastos e outras células nucleadas que contenham as organelas citoplasmáticas certamente atingirão a saturação completa, possivelmente à razão dos resultados obtidos nas doenças citadas.

CONTEXT AND OBJECTIVE: The coenzyme of aspartate aminotransferase is pyridoxal phosphate, generated from fresh vegetables containing pyridoxine. Vitamin B6-responsive sideroblastic anemia, myelofibrosis and Peyronie’s syndrome respond to high pyridoxine doses. The objective was to investigate the oral pyridoxine oral dose that would lead to maximized pyridoxal phosphate saturation of red cell aspartate aminotransferase. DESIGN AND SETTING: Controlled trial, in Hematology Division of Instituto Adolfo Lutz. METHODS: Red cell aspartate aminotransferase activity was assayed (before and after) in normal volunteers who were given oral pyridoxine for 15-18 days (30 mg, 100 mg and 200 mg daily). In vitro study of blood from seven normal volunteers was also performed, with before and after assaying of aspartate aminotransferase activity. RESULTS: The in vivo study showed increasing aspartate aminotransferase saturation with increasing pyridoxine doses. 83% saturation was reached with 30 mg daily, 88% with 100 mg, and 93% with 200 mg after 20 days of oral supplementation. The in vitro study did not reach 100% saturation. CONCLUSIONS: Neither in vivo nor in vitro study demonstrated thorough aspartate aminotransferase saturation with its coenzyme pyridoxal phosphate in red cells, from increasing pyridoxine supplementation. However, the 200-mg dose could be employed safely in vitamin B6-responsive sideroblastic anemia, myelofibrosis and Peyronie’s syndrome treatment. Although maximum saturation in circulating red cells is not achieved, erythroblasts and other nucleated and cytoplasmic organelles containing cells certainly will reach thorough saturation, which possibly explains the results obtained in these diseases.

A contagem precisa e exata de plaquetas é crucial para se indicar ou não a transfusão de plaquetas em pacientes plaquetopênicos, principalmente quando as contagens estão abaixo de 30.000/µl. Como muitos laboratórios ainda utilizam as contagens indiretas em esfregaço para confirmar baixas contagens obtidas por automação, este trabalho se propôs a comparar dois métodos indiretos muito usados (Fonio e Nosanchunk et al.) com o método direto indicado pelo Comitê Internacional de Estandardização em Hematologia (ICSH) (Brecher e Cronkite). Os dados obtidos demonstram que os métodos indiretos em esfregaço apresentam baixa precisão e exatidão e que o método direto de referência deve ser usado para confirmar as contagens em amostras intensamente plaquetopênicas.

Accurate and precise platelet counting is crucial for recommending platelets transfusion for thrombocytopenic patients, principally when platelet counts are bellow 30,000/µl. As most laboratories still use the indirect methods for confirming low automated platelet counts, this work compared two indirect methods used in practice (Fonio and Nosanchunk et al.) with the International Committee for Standardization in Hematology recommended direct method (Brecher and Cronkite). The obtained data show that the indirect methods present low precision and accuracy, and that the direct method should always be employed in severe thrombocytopenic samples thanks to its high precision.

CONTEXTO: A quebra do equilíbrio entre a protease erritrocitária calpaina I e o seu inibidor fisiológico calpastatina tem sido relatado em pacientes com hipertensão essencial. OBJETIVO: Neste trabalho a atividade da calpaina I presente nos hemolisados foi investigada contra as próprias proteinas da membrana eritrocitária TIPO DE ESTUDO: avaliação da atividade da calpaina I contra os próprios substratos fisiológicos em pacientes hipertensos em ambiente aproximandamente fisiológico. LOCAL: LIM-23 e LIM-40 do Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina da USP PACIENTES: Pacientes com hipertensão primária moderada que receberam amlodipina (n:10), captopril (n:10), bem como controles normais (n:10) VARIÁVEIS ESTUDADAS: Proteinas da membrana eritrocitária foram incubadas com e sem inibidor, e com e sem cloreto de calcio. RESULTADOS: As bandas 2.1 e 4.1 foram digeridas, indicando a atividade da calpaina I. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes em relação às bandas 2.1 e 4.1 entre os controles e os pacientes antes do tratamento, seja sem calcio seja com concentrações crescentes de cálcio. Também não foram encontradas diferenças estatísticamente significantes entre os controles e os pacientes depois do tratamento com amlodipin e captopril, bem como entre os pacientes antes e depois do tratamento. CONCLUSÃO: A atividade final da calpaina I não purificada contra os seus próprios substratos fisiológicos pode refletir mais adequadamente o que acontece no glóbulo vermelho, e nessas condições, não foi encontrado desequilíbrio favorecendo o aumento da atividade da calpaina I. Fatores protetores da calpastatina à atividade da calpaina I existentes na hipertensão poderiam estar diminuidos.

CONTEXT: It has been reported that the equilibrium between the erythrocyte protease calpain I and its physiological inhibitor calpastatin is disrupted in patients with essential hypertension. OBJECTIVE: To investigate the activity of non-purified calpain I in hemolysates against the erythrocytic membrane proteins, rather than against other substrates. DESIGN: Evaluation of calpain I red cell activity upon its own physiological substrates in hypertensive patients, in a near-physiological environment. SETTING: LIM-23 and LIM-40 of Hospital das Clinicas of the Faculty of Medicine of USP. SAMPLE: Patients with moderate primary hypertension over 21 years of age who were given amlodipine (n:10) and captopril (n:10) for 8 weeks, plus normal controls (n:10). MAIN MEASUREMENTS: Red cell membrane proteins were incubated with and without protease inhibitors and with and without calcium chloride and underwent polyacrylamide gel electrophoresis. RESULTS: Digestion of bands 2.1 and 4.1 was observed, indicating calpain I acitivity. No statistical differences regarding bands 2.1 and 4.1 were observed before treatment, between the controls and the hypertensive patients, either in ghosts prepared without calcium or with increasing concentrations of calcium. Nor were statistical differences observed after treatment, between the controls and the patients treated with amlodipine and captopril, or between the patients before and after treatment with both drugs. CONCLUSION: The final activity of non-purified calpain I upon its own physiological substrate, which was the approach utilized in this study, may more adequately reflect what happens in red cells. Under such conditions no imbalance favoring calpain I activity increase was observed. The protective factor provided by calpastatin against calpain I activity may diminish under hypertension.

CONTEXTO: A solução preservadora ADSOL (adenina, dextrose, sorbitol, cloreto de sódio e manitol) mantém a viabilidade dos glóbulos vermelhos para transfusão durante seis semanas. Seria assim útil determinar sua preservação por tempos maiores. OBJETIVO: Determinar alguns parâmetros bioquímicos eritrocitários até 14 semanas visando saber se a integridade do metabolismo eritrocitário justificaria estudos posteriores com o propósito de alongar sua preservação e viabilidade. TIPO DE ESTUDO: Avaliação bioquímica para avaliar a preservação de hemácias. LOCAL: Centro de referência de metabolismo eritrocitário da Faculdade de Medicina da USP, São Paulo e Universidade Federal do Paraná, Curitiba. AMOSTRA: Seis doadores de sangue do hospital universitário da Universidade Federal do Paraná, Curitiba, Brasil. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Foi realizada a determinação semanal de adenosina-5´-trifosfato, 2,3-difosfoglicerato, hexoquinase, fosfofrutoquinase, piruvato quinase, glicose-6-fosfato desidrogenase, 6-fosfogliconico desidrogenase, gliceraldeido-3-fosfato desi-drogenase, glutationa redutase, glutationa peroxidase, bem como a dosagem de sódio e potássio plasmáticos, pH sangüíneo, e a determinação das proteínas da membrana eritrocitária por eletroforese em gel de poliacrilamida. RESULTADOS: Durante a preservação o ATP caiu 60% em cinco semanas, e 90% depois de 10 semanas. O 2,3-DPG permaneceu estável durante a primeira semana, caiu 90% depois de três semanas e se exauriu depois de cinco semanas. O pH decresceu de 6,8 na primeira semana a 6,4 na 14a semana. Depois de cinco semanas houve diminuição de 16 a 31% das atividades da hexoquinase, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase, glutationa redutase, e 45% da piruvato quinase. Em seguida, observou-se um decréscimo de 10% para todas enzimas até a 14a semana. A eletroforese em gel de poliacrilamida das proteínas da membrana eritrocitária não revelou alterações nas concentrações relativas das bandas durante e ao cabo das 14 semanas. CONCLUSÕES: Embora a viabilidade do sangue seja pobre da 6a à 14a semana, devido à depleção de ATP e de 2,3-DPG, os demais parâmetros bioquímicos decaíram gradualmente. Este achado pode sugerir que os glóbulos vermelhos preservados em ADSOL possam ser utilizados como padrões de enzimas eritrocitárias e de proteínas da membrana.

CONTEXT: The preservative solution ADSOL (adenine, dextrose, sorbitol, sodium chloride and mannitol) maintains red cell viability for blood trans-fusion for 6 weeks. It would be useful to know about its preservation qualities over longer periods. OBJECTIVE: To determine some red cell biochemical parameters for peri-ods of up to 14 weeks in order to determine whether the red cell metabo-lism integrity would justify further studies aiming at increasing red cell preservation and viability. DESIGN: Biochemical evaluation designed to study red cell preservation. SETTING: São Paulo University erythrocyte metabolism referral center. SAMPLE: Six normal blood donors from the University Hospital of the Universidade Federal do Paraná, Curitiba, Brazil. MAIN MEASUREMENTS: Weekly assay of erythrocyte adenosine-5´-triphosphate (ATP), 2,3-diphosphoglycerate (2,3DPG), hexokinase (HX), phosphofructokinase (PFK), pyruvate kinase (PK), glucose-6-phosphate dehydrogenase (G-6-PD), 6-phosphogluconic dehydrogenase (6-PGD), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPD), glutathione reduc-tase (GR), glutathione peroxidase (GSHPx), plasma sodium and potas-sium, blood pH, and membrane proteins of red cells preserved in ADSOL were studied during storage for 14 weeks storage. RESULTS: During ADSOL preservation, erythrocyte ATP concentration decreased 60% after 5 weeks, and 90% after 10 weeks; the pH fell from 6.8 to 6.4 by the 14th week. 2,3-DPG concentration was stable during the first week, but fell 90% after 3 weeks and was exhausted after 5 weeks. By the end of the 5th week, an activity decrease of 16-30% for Hx, GAPD, GR, G-6-PD and 6-PGD, 35% for PFK and GSHPx, and 45% for PK were observed. Thereafter, a uniform 10% decay was observed for all enzymes up to the 14th week. The red blood cell membrane pro-teins did not show significant alterations in polyacrylamide gel electro-phoresis (SDS-PAGE) during the 14 weeks. CONCLUSION: Although the blood viability was shown to be poor from the 6th week up to the 14th week of storage due to ATP and 2,3-DPG depletion, the other biochemical parameters remained in fairly good condition for longer storage. As there is a gradual and uniform decay in activity throughout these 14 weeks, it seems that ADSOL-preserved red cells may be used as red cell enzyme standards and membrane proteins as well.

No período compreendido entre abril e outubro de 1988, foram estudadas 363 gestantes de primeira consulta , que estavam inscritas no Programa de Atendimento à Gestante em oito Centros de Saúde da Secretaria da Saúde do Estado de São Paulo (Brasil). Na ocasião da coleta de material estas gestantes não faziam uso de medicamentos que continham ferro, ácido fólico, vitamina B12 ou associações destes. A idade média das gestantes foi de 25 anos; 65,9% delas pertenciam a famílias com renda de até um SMPC (salário mínimo per capita) e apenas 3,1% pertenciam a famílias com renda superior a 3 SMPC. Tomando-se a saturação da transferrina inferior a 15% como índice mínimo para definir a deficiência de ferro, a prevalência de deficiência de ferro no primeiro trimestre (4,6%) foi significativamente menor do que a observada no segundo (17,3%), e esta foi menor do que no terceiro trimestre (42,8%). A prevalência de deficiência de ferro total agrupada nos três trimestres foi de 12,4%. Não houve diferença significativa entre as prevalências de deficiência de ferro segundo o número de partos. Esta prevalência foi maior no grupo das gestantes que pertenciam a famílias com renda de até 0,5 SMPC. Nas gestantes anêmicas, 46,7% eram deficientes de ferro, 44,4% de ácido fólico, 20,0% de ferro e ácido fólico e nenhuma delas eram deficientes de vitamina B12.

Three hundred and sixty-three pregnant women enrolled in the Pregnancy Medical Care Program of S. Paulo Health Department in the district of Butantan, S. Paulo city, Brazil, were studied at their first routine consultation between April and October, 1988. Their average age was 25 and 65,9% of them belonged to families with a monthly income below US$ 50.00 per capita. Only 3.1% presented an income above US$ 150.00 per capita. Taking the minimum transferrin saturation threshold of 15% as determining iron deficiency, a 4.6% prevalence of iron deficiency was observed in the first trimester, 17.3% in the second trimester and 42.8% in the third trimester, resulting in an overall prevalence of 12.4%. There was no significant difference between prevalences of iron deficiency according to the number of pregnancies. The prevalence of iron deficiency was higher in women presenting incomes below US$ 50.00 per capita.

No período compreendido entre abril e outubro de 1988, foram estudadas 363 gestantes de primeira consulta , que estavam inscritas no Programa de Atendimento à Gestante em oito Centros de Saúde da Secretaria da Saúde do Estado de São Paulo (Brasil). Na ocasião da coleta de material estas gestantes não faziam uso de medicamentos que continham ferro, ácido fólico, vitamina B12 ou associações destes. A idade média das gestantes foi de 25 anos; 65,9% delas pertenciam a famílias com renda de até um SMPC (salário mínimo per capita) e apenas 3,1% pertenciam a famílias com renda superior a 3 SMPC. Tomando-se a saturação da transferrina inferior a 15% como índice mínimo para definir a deficiência de ferro, a prevalência de deficiência de ferro no primeiro trimestre (4,6%) foi significativamente menor do que a observada no segundo (17,3%), e esta foi menor do que no terceiro trimestre (42,8%). A prevalência de deficiência de ferro total agrupada nos três trimestres foi de 12,4%. Não houve diferença significativa entre as prevalências de deficiência de ferro segundo o número de partos. Esta prevalência foi maior no grupo das gestantes que pertenciam a famílias com renda de até 0,5 SMPC. Nas gestantes anêmicas, 46,7% eram deficientes de ferro, 44,4% de ácido fólico, 20,0% de ferro e ácido fólico e nenhuma delas eram deficientes de vitamina B12.

Three hundred and sixty-three pregnant women enrolled in the Pregnancy Medical Care Program of S. Paulo Health Department in the district of Butantan, S. Paulo city, Brazil, were studied at their first routine consultation between April and October, 1988. Their average age was 25 and 65,9% of them belonged to families with a monthly income below US$ 50.00 per capita. Only 3.1% presented an income above US$ 150.00 per capita. Taking the minimum transferrin saturation threshold of 15% as determining iron deficiency, a 4.6% prevalence of iron deficiency was observed in the first trimester, 17.3% in the second trimester and 42.8% in the third trimester, resulting in an overall prevalence of 12.4%. There was no significant difference between prevalences of iron deficiency according to the number of pregnancies. The prevalence of iron deficiency was higher in women presenting incomes below US$ 50.00 per capita.

No período compreendido entre abril e outubro de 1988, foram estudadas 481 gestantes de primeira consulta, as quais estavam inscritas no Programa de Atendimento à Gestante em oito Centros de Saúde da Secretaria do Estado da Saúde de São Paulo. Do total estudado, 86 gestantes não trouxeram amostras de fezes para análise, mesmo após várias solicitações. A idade média da população estudada foi de 24,5 anos (idade mínima de 14 e máxima de 46 anos); a renda média das famílias das gestantes foi de 0,97 SMPC (salário mínimo per capita) e o número médio de pessoas que compunham suas famílias foi de quatro (um a quinze pessoas). A prevalência de verminose foi de 45,1% (n=395). Os parasitas mais freqüentes foram: Ascaris lumbricoides (19,0%); ancilostomídeos (16,7%) e Trichuris trichiura (15,9%). Das 248 gestantes infectadas de enteroparasitas, 70 (28,2%) eram portadoras somente dos seguintes protozoários: Endolimax nana, Entamoeba coli e Iodamoeba butschllii. A prevalência de parasitas intestinais foi significativamente maior (p<0,05) nas gestantes pertencentes às famílias com renda de até 0,5 SMPC e compostas por 5 pessoas ou mais.

481 pregnant women attented at first consultation from a São Paulo city suburb-subdistrict of Butantan- São Paulo State, Brazil, from April to October of 1988, were investigated regarding the prevalence of verminosis. The mean age was 24,5 years (range 14-46), the average family income was 0.97 PCMW (per capita minimum wage) and the average number of members of the family was 4 (1 to 15). The verminosis prevalence was 45,1% among the women. The most frequent parasites were: Ascaris lumbricoides (19,0%), ancilostomideos (16,7%) and Trichuris trichiura (15,9%), The verminosis prevalence was significantly higher among the pregnant women (p < 0.05) who belonged to the families with income below 0.5 PCMW and greater than 4 members.