Resumo O objetivo deste estudo foi otimizar e estabelecer um protocolo visando elevar a qualidade e quantidade do ácido desoxirribonucleico (DNA) extraído de folhas, em diferentes estágios de desenvolvimento e conservação, coletadas em plantas adultas e plantas jovens. Além disso, almejou-se padronizar a amplificação via reação de polimerase em cadeia (PCR) e selecionar os marcadores de inter sequência simples repetida (ISSR) de Elaeis guineensis (dendezeiro). O protocolo brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB) modificado, devido à suplementação com betamercapto etanol (0,3%) e polivinilpirrolidone (PVP) (3%) no tampão de extração e CTAB 10% com 1,4 M de NaCl a 20 min de incubação, a 650C, resultou em melhorias qualitativas e quantitativas na extração do DNA, mas com variações entre amostras, provavelmente, devido às variações na degradação e estágio de desenvolvimento das folhas. Foram utilizados dois protocolos de PCR (I e II) para a amplificação do DNA, os quais diferiram principalmente com relação à presença de albumina de soro bovino (BSA) e concentração de primer. Não foi realizada a correlação entre amplificação via PCR e qualidade de DNA, obtidos de folhas danificadas ou sadias, mas se observou que a adição de BSA (0,075 mg/mL) e o aumento na concentração de primer (0,5 pcmol) (protocolo II) resultou em bandas mais intensas e distinguíveis, porém se ressalta que a qualidade do DNA foi essencial para uma boa amplificação, considerando-se todas as amostras. A amplificação do DNA com o protocolo II possibilitou a seleção de cinco primers: UBC 807, 810, 812, 834 e 848; os quais foram utilizados para a amplificação de13 famílias, compostas de uma planta parental e oito progênies cada.

Abstract The objective of this study was to optimize and establish a protocol to enhance the quality and quantity of deoxyribonucleic acid (DNA) extracted from leaves under different development stages and conservation conditions collected from mature plants and seedlings. Furthermore, we aimed to standardize the polymerase chain reaction (PCR) and select an inter simple sequence repeat (ISSR) marker for Elaeis guineensis (oil palm). The modified cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) protocol, which used β-mercaptoethanol (0.3%) and polyvinylpyrrolidone (PVP 3%) supplementation in the extraction buffer and 10 % CTAB with 1.4 M NaCl for a 20-min incubation at 65ºC, resulted in improved DNA quality and quantity. However, this protocol presented variable results among samples, probably due to variations in leaf degradation levels and development stages. The two PCR protocols (I and II) for amplifying the DNA, differed mainly in the presence or absence of bovine serum albumin (BSA) and primer concentration. Although, a correlation between PCR amplification and the quality of the DNA extracted from leaves was not established, the addition of BSA (0.075 mg/mL) and the highest primer concentration (0.5 pmol) (protocol II) resulted in more intense and distinguishable bands on gel electrophoresis. DNA quality was essential for a satisfying amplification, considering all the samples. The use of protocol II allowed the selection of five primers: UBC 807, 810, 812, 834, and 848; these were used in the amplification of the DNA extracted from 13 families consisting of one parental plant and eight progenies each.

32 clones de cacau selecionados como resistentes após a epidemia da vassoura-de-bruxa e com destacada produtividade foram caracterizados quanto à diversidade genética e submetidos a nova seleção. Essas plantas foram avaliadas por oito anos na Fazenda Oceania (FO), em Itagibá, BA, Brazil. Os 13 primers microssatélites geraram em média 11,7 alelos (amplicons) por loco, com base nos quais se demonstrou que os 32 clones distribuem-se em grupos distintos dos nove clones utilizados como testemunhas. Os 32 materiais apresentaram diferenças significativas para os caracteres analisados em campo. Dois critérios foram formados pela classificação das plantas mais produtivas e resistentes e utilizados para selecionar plantas dentro dos agrupamentos. Essas plantas selecionadas apresentam potencial para o programa de melhoramento do cacau, possuem elevada produção e alta resistência à vassoura-de-bruxa.

The 32 cacao clones selected as being resistant following the witches’ broom epidemic and for having distinct productivity were characterized according to their genetic diversity and were submitted to a new selection. These plants were assessed for eight years at the Oceania Farm (FO) in Itagibá, Bahia, Brazil. The 13 microsatellite primers generated an average of 11.7 amplicons per locus, and based on them it was demonstrated that the 32 clones distribute themselves in groups apart from the nine clones used as controls. The 32 materials displayed significant differences in relation to the characters assessed in the field. Two criteria were formed from the classification of the most productive and resistant plants, and then used to select plants within the clusters. The selected plants displayed potential for the cacao improvement program, that they have a high production and high resistance to witches' broom.