Resumo O osteossarcoma é uma neoplasia mesenquimal associada à alta mortalidade em cães e humanos. O pequi (Caryocar brasiliense, Camb.) é nativo do Cerrado, bioma rico em biodiversidade predominante na região Centro-Oeste do Brasil. Embora esta planta seja frequentemente utilizada na medicina popular, as propriedades farmacológicas da casca do pequi ainda são pouco conhecidas. Este estudo teve como objetivo determinar a atividade citotóxica do extrato etanólico de cascas de pequi recicladas em células de osteossarcoma canino. As células foram cultivadas e tratadas com concentrações finais de extrato de zero, 0,029 µg/µL, 0,29 µg/µL e 2,91 µg/µL por 24, 48 ou 72 horas. As células foram submetidas a ensaio de viabilidade celular pelos métodos de exclusão de azul de tripano da redução de tetrazólio para determinar a IC50, ao ensaio de sobrevivência celular para calcular a fração de sobrevivência e à dupla marcação com anexina V e iodeto de propídio para determinar o tipo de morte celular. O extrato etanólico de casca de pequi na concentração de 2,91 µg/µL apresentou a maior inibição do crescimento de células de osteossarcoma, com redução de 71,80% no crescimento em relação ao controle. A IC50 média foi de 155,2 μg/mL em 72 horas. O crescimento celular em 72 horas foi 3,33% menor nas células tratadas com 2,91 µg/µL de extrato. A apoptose foi o tipo predominante de morte celular em células tratadas com 2,91 µg/µL de extrato. Esses resultados demonstram que o extrato etanólico de cascas de pequi recicladas promove apoptose em células de osteossarcoma canino.

Abstract Osteosarcoma is a mesenchymal cancer associated with high mortality in dogs and in humans. The biodiversity-rich Cerrado, the predominant biome in the Midwest region of Brazil, is native to locally appreciated fruits such as pequi (Caryocar brasiliense, Camb). Although this plant has been frequently used in folk medicine, the pharmacological properties of pequi fruit shells have not been fully evaluated. Thus, this study aimed to determine the cytotoxic activity of ethanol extract of recycled pequi shells on canine osteosarcoma cells in vitro. Cells were cultured and treated with final extract concentrations of 0, 0.029 µg/µL, 0.29 µg/µL, and 2.91 µg/µL for 24, 48, or 72 hours. Cell viability assay using trypan blue exclusion method and tetrazolium reduction method, cell survival assay, and double labeling with annexin V and propidium iodide were performed in the treated osteosarcoma cells. These allowed the determination of IC50, survival fraction, and type of cell death, respectively. Pequi shell ethanol extract at a concentration of 2.91 µg/µL showed the greatest inhibition of osteosarcoma cell growth in vitro, resulting in a 71.80% decrease in growth compared to the control. The mean IC50 was 155.2 μg/mL at 72 hours. The calculated survival fractions showed that cell growth at 72 hours was 3.33% lower in cells treated with 2.91 µg/µL extract. Results from the double labeling experiment suggest that apoptosis was the predominant type of cell death in cells treated with 2.91 µg/µL extract. These results demonstrate that ethanol extract of recycled pequi shells promotes apoptosis in canine osteosarcoma cells.

Resumo A Curcuma longa L., planta conhecida popularmente como açafrão, tem sido amplamente estudada por suas diversas propriedades terapêuticas, incluindo a ação antineoplásica. O extrato etanólico da planta contém diversos compostos fenólicos, com destaque para a curcumina. O osteossarcoma é um tumor ósseo predominante em cães e humanos, caracterizado por apresentar alto potencial metastático e prognóstico desfavorável. Procurou-se investigar os efeitos de diferentes concentrações de curcumina do extrato etanólico de açafrão sobre células de osteossarcoma canino de cultura estabelecida. As células foram cultivadas e submetidas ao tratamento com extrato com diferentes concentrações de curcumina (0, 10 μM, 20 μM, 50 μM, 100 μM e 1000 μM) e tempos de exposição (24h, 48h e 72h) pelo EEA. Inicialmente, foram realizados: técnica de redução do tetrazólio (MTT) e cálculo da IC50. Posteriormente, após o tratamento com o extrato, realizou-se o ensaio de imunocitoquímica para verificar a expressão de p53 mutada e estudar o potencial proliferativo das células malignas; Bcl-2, com intuito de averiguar o estímulo de via antiapoptótica; e o marcador Ki-67, que sinaliza aumento no grau de malignidade. O extrato promoveu proliferação de células de osteossarcoma canino, com incremento de até 3819,74% na concentração de 50μM de curcumina. O composto também alterou a expressão das proteínas p53 mutante e Ki-67 significativamente, mas não alterou a expressão de Bcl-2, mostrando que não induziu a via antiapoptótica mediada por esta. Estes resultados demonstram que o extrato etanólico do açafrão apresenta potencial proliferativo sobre células de osteossarcoma canino, sugerindo a necessidade de conscientização e conhecimento dos reais efeitos de determinados compostos naturais, considerados seguros ao serem utilizados como tratamento de diversas enfermidades.

Abstract Curcuma longa L., also known as turmeric, has been widely studied for its various therapeutic properties, including antineoplastic action. The ethanolic extract of the plant contains several phenolic compounds, especially curcumin. Osteosarcoma is a predominant bone tumor in dogs and humans, characterized by high metastatic potential and an unfavorable prognosis. The aim of this study was to investigate the effects of turmeric ethanol extract on canine osteosarcoma cells from established culture. The cells were cultured and treated with different curcumin concentrations (0, 10 μM, 20 μM, 50 μM, 100 μM, and 1000 μM) and exposure times (24h, 48h, and 72h). We first performed tetrazolium reduction technique (MTT) assay and calculated IC50. An immunocytochemistry assay was performed after extract treatment to verify the expression of mutated p53 and therefore study the proliferative potential of malignant cells; Bcl-2 and Ki-67 were used to assess apoptosis and the degree of malignancy, respectively. The extract enhanced the proliferation of canine osteosarcoma cells, reaching 3,819.74% at 50 μM of curcumin. The extract also significantly altered the expression of mutated p53 and Ki-67 proteins but not that of Bcl-2, suggesting that it did not induce this antiapoptotic pathway. Overall, these results are prerequisite to better understanding how natural compounds such as turmeric ethanolic extract affect cell proliferation and could be used to treat various diseases.

RESUMO: A expressão gênica de ErbB1 e ErbB2 e a imunomarcação de EGFR (Her1) e Her2 (c-erbB-2) foram avaliadas para verificar o envolvimento desses receptores em lesões pré-malignas e malignas da próstata canina, como a atrofia proliferativa inflamatória (PIA) e o carcinoma prostático (PC). Em relação à intensidade de imunomarcação para EGFR, não houve diferença entre o tecido prostático normal e com PIA e PC. Em relação a Her2, observou-se diferença de imunomarcação entre o tecido prostático normal e aqueles com PIA e PC e entre os com PIA e PC. Não houve correlação entre EGFR e Her2. O gene ErbB1 foi detectado em duas amostras normais, uma de PIA e em todas as amostras de PC. O gene ErbB2 foi detectado em duas amostras de PIA e em todas as amostras de PC, não sendo detectado no tecido prostático normal. Conclui-se que EGFR e Her2 atuam nas lesões de PIA e PC, sugerindo o envolvimento destes na carcinogênese da próstata canina.

ABSTRACT: Gene expression of ErbB1 and ErbB2, and immunostaining of EGFR (Her1) and Her2 (c-erbB-2) were evaluated in this study to ascertain whether these receptors are involved in the evolution of canine premalignant and malignant prostatic lesions, as proliferative inflammatory atrophy (PIA) and prostatic carcinoma (PC). With regards to the intensity of EGFR immunostaining, there was no difference between normal prostatic tissue and tissues with PIA or PC. In relation to Her2 immunostaining, there were differences between normal prostatic tissue and those with PIA and PC, as also differences between prostates with PIA and PC. There was no correlation between EGFR and Her2 immunostaining. ErbB1 gene product was detected in two normal tissue samples, in one with PIA, and in all samples with PC. ErbB2 mRNA was recorded in two canine samples with PIA, in all with PC, but was not detected in normal prostatic tissue. It was concluded that EGFR and Her2 play roles in canine PIA and PC, suggesting that those receptors may be involved in canine prostatic carcinogenesis.

Os efeitos do uso tópico e intraluminal da Solução de Carolina Rinse (CRS), no perfil de ativação das MAP quinases p44/42 (ERK 1/2) e p38, no jejuno de coelhos após isquemia e reperfusão (I/R), foram investigados neste estudo. Quinze coelhos da raça Nova Zelândia foram alocados em três grupos: Instrumentado (A), Isquemia e Reperfusão (B) e CRS (C). Os grupos B e C foram submetidos a uma hora de isquemia e duas horas de reperfusão. No grupo C, dez minutos antes da reperfusão, o lúmen do segmento isolado foi preenchido com CRS e o segmento foi imerso em CRS até o início da reperfusão. A isquemia e reperfusão resultou em estímulo da fosforilação das MAP quinases p44/42 e p38 em algumas camadas do jejuno. A ativação progressiva de p44/42 ocorreu principalmente nas criptas de Lieberkühn e camadas musculares longitudinal e circular, enquanto p38 foi ativada principalmente no plexo mioentérico e em ambas as camadas musculares. Os resultados deste trabalho indicam que o modelo escolhido de uso tópico e intraluminal de CRS não interfere no perfil de ativação das MAP quinases p44/42 e p38 no jejuno de coelhos submetidos à I/R.

The effects of topical and intraluminal Carolina Rinse Solution (CRS) in p44/42 (ERK 1/2) and p38 MAPK activation profile, in rabbit jejunum after ischemia and reperfusion (I/R), were investigated in this study. Fifteen New Zealand rabbits were allocated in three groups: Sham-operated (A), Ischemia and reperfusion (B) and CRS (C). Groups B and C were subjected to one hour of ischemia and two hours of reperfusion. In group C, ten minutes prior to reperfusion, the bowel lumen was filled with CRS, and the segment was immersed in CRS until reperfusion onset. Ischemia and reperfusion stimulated the phosphorylation of the p44/42 MAPK and p38 MAPK pathways in some layers of jejunum. Progressive activation of p44/42 MAPK was chiefly localized in the crypts of Lieberkühn, circular and longitudinal muscle layers, whereas p38 MAPK was prominently activated in myenteric plexus and both muscle layers. The results of this research indicate that the chosen model of topical and intraluminal CRS does not interfere in p44/42 and p38 MAPK activation profile in rabbit jejunum subjected to I/R.

As neoplasias mamárias são as mais frequentes em cadelas, representando 25 a 30% do total das afecções neoplásicas das fêmeas caninas. Durante a carcinogênese ocorrem várias modificações na expressão de proteínas, como a Cyr61, envolvida na proliferação celular e na angiogênese. Assim, este estudo teve por objetivo determinar o perfil de expressão dessa proteína, por meio da técnica de imunoistoquímica, em glândulas mamárias normais e neoplásicas de cadelas. Para tal, foram selecionados 10 casos de cada um dos diagnósticos: adenoma simples, carcinoma complexo e carcinoma simples sólido, além de 10 fragmentos de glândulas mamárias normais, perfazendo o total de 40 fragmentos. O anticorpo policlonal anti-Cyr61 apresentou marcação em células epiteliais mamárias normais, evidenciando seu papel nos mecanismos de apoptose e proliferação celular. Houve ainda acentuada imunomarcação em tecidos mamários normais e com adenomas, e marcação discreta em carcinomas, diferente do padrão de expressão observado no tecido mamário de mulheres. A expressão constitutiva da proteína Cyr61 foi demonstrada no tecido mamário canino, constituindo uma alternativa de investigação neoplásica para as alterações mamárias de cadelas.

Mammary glands are the most usual sites of tumors in bitches, representing 25 to 30% of all types of cancer. During cancer genesis, several genetic changes alter the expression of different proteins like Cyr61, a peptide involved in cell proliferation and angiogenesis. This work aimed to determine through immunohistochemistry the expression profile of Cyr61 in normal and neoplastic mammary glands from bitches. So, 10 cases of each diagnose were selected: simple adenoma, complex carcinoma, simple solid carcinoma and fragments of normal mammary glands, in a total of 40 cases. Sections were subjected to immunohistochemistry, employing primary antibodies directed Cyr61. Cyr61 labeling of normal mammary epithelial cells is probably linked to its role in apoptosis and cellular proliferation. The labeling was more intense in normal and adenoma fragments and was discrete in the labeling malignant tumor sections, a different feature of expression from previously reports in human breast cancer. Immunohistochemical analysis with polyclonal antibody Cyr61 demonstrated the constitutive expression of the protein and contributed to neoplastic research alternative for tumors in bitches.

Esse trabalho avaliou as mudanças na contagem de leucócitos e algumas proteínas séricas de bovinos confinados e terminados a pasto. De 120 amostras sangüíneas coletadas, 60 foram obtidas de bovinos Nelores machos confinados e 60 de animais com as mesmas características, porém manejados extensivamente. As amostras foram obtidas por ocasião do abate desses animais. Os parâmetros estudados foram contagem de leucócitos, razão albumina/globulina e concentração de fibrinogênio plasmático. Na análise dos dados empregou-se estatística descritiva, obtendo-se as médias, desvio padrão e coeficiente de variação para todos as variáveis avaliadas e posteriormente comparou-se as médias por meio de teste não-paramétrico. Os bovinos terminados a pasto apresentaram maior nível de globulina e fibrinogênio (P>0,05) quando comparados com os confinados (globulina: pastejo=3,29g dL-1 0,76; confinamento 2,99g dL-1±0,60 e Fibrinogênio: pastejo=872mg dL-1±610; confinamento=633mg dL-1±319). O número de leucócitos total foi de 7,64±2,15 em bovinos confinados e de 7,72±1,84 nos terminados a pasto. Não houve diferença (P>0,05) entre essa variável e a contagem diferencial de leucócitos bem como na proteína sérica total (g dL-1) dos bovinos terminados a pasto (6,10±0,53) e dos confinados (5,96±0,49). O nível de albumina dos bovinos confinados (3,01g dL-1±0,43) e a razão A/G (1,07±8,91) foram maiores quando comparados com os bovinos terminados a pasto (2,82g dL-1±0,45) e (0,95±0,38) respectivamente. O nível mais elevado de albumina nos bovinos confinados sugere que eles foram submetidos a uma dieta nutricional mais adequada. O constante desafio imunológico sofrido pelos animais terminados a pasto pode ter sido responsável pelo elevado nível de globulina e fibrinogênio. Esses resultados indicaram que, apesar das adversidades que os bovinos confinados são submetidos, eles não apresentaram alterações correlacionadas com esse fato.

This research aimed to evaluate the changes in the white blood cell count and some serum proteins of confined cattle (CC) and grass cattle (GC). From the 120 blood samples collected, 60 were obtained from confined Nelore male bovines and 60 from animals with the same characteristics but managed extensively. Samples were obtained at the moment of slaughter. Parameters studied were the white blood cell count, serum albumin/globulin ratio and concentration of plasma fibrinogen. Descriptive statistics was used in the analysis of the data, and the averages, standard deviation and coefficient of variation calculated for all parameters evaluated. The comparisons between averages were made by non-parametric test. The grazing cattle showed higher levels of globulin and fibrinogen when compared to the confined ones (globulin: GC=3.29g dL-1±0.76; CC=2.99g dL-1±0.60 and Fibrinogen: GC=872mg dL-1±610; CC=633mg dL-1±319). The total number of white blood cells mL-1 was 7.64±2.15 in confined cattle and 7.72±1.84 in grazing cattle. There was no significant difference between this variable and differential white blood cell count as well as the total serum protein (g dL-1) from grazing cattle (6.10±0.53) and confined cattle (5.96±0.49). The level of albumin from confined cattle (3.01g dL-1± 0.43) and the A/G ratio (1.07±8.91) were greater when compared to the grazing bovines (2.82g dL-1±0.45) and (0.95±0.38) respectively. The higher serum levels of albumin found in confined herd suggest that they were subjected to a more adequate nutritional diet. The constant immunological challenge suffered by the GC could be responsible for the elevated serum levels of globulin and fibrinogen. These results showed that although feedlots present a stressful environment they did not show any blood alterations correlated to this fact.