Antígeno total de Leishmania (Leishmania) amazonensis e isolado do complexo Leishmania brazilienis, assim como suas respectivas frações antigênicas obtidas por cromatografia de afinidade em coluna de concanavalina-A ligada a sepharose e Jacalina ligada a agarose foram avaliadas por ensaio imunoenzimático ELISA. Para tanto, foram utilizadas amostras de soros de 229 pacientes agrupadas em leishmaniose tegumentar americana (nº=58), leishmaniose visceral (nº=28), doença de Chagas (nº=49), malaria (nº=32), tuberculose (nº=13) e voluntários saudáveis (nº=49). Houve maior reatividade das amostras de leishmaniose tegumentar americana com a utilização dos antígenos obtidos do isolado do complexo Leishmania braziliensis quando comparado com antígenos de Leishmania amazonensis (p<0,001). Observou-se ainda que a sensibilidade do teste ELISA variou de 60 a 95% entre os antígenos obtidos do isolado do complexo Leishmania braziliensis. Houve acentuada reatividade inespecífica das amostras de soros com a utilização das frações antigênicas ligantes de Concanavalina-A e Jacalina de ambos os complexos Leishmania em comparação aos demais antígenos (p<0,001). Os resultados apresentados no presente trabalho sugerem que a utilização de antígenos homólogos aumentam a eficiência de detecção de imunoglobulina anti-Leishmania o que pode ser de grande valia para o propósito de diagnóstico.

Total antigen from Leishmania (Leishmania) amazonensis and isolates from the Leishmania braziliensis complex, along with their respective antigenic fractions obtained by affinity chromatography on concanavalin-A-Sepharose and jacalin-agarose columns evaluated using immunoenzymatic ELISA assay. For this, serum samples from 229 patients were used, grouped as American tegmental leishmaniasis (nº=58), visceral leishmaniasis (nº=28), Chagas disease (nº=49), malaria (nº=32), tuberculosis (nº=13) and healthy volunteers (nº=49). Samples from American tegmentary leishmaniasis showed higher reactivity with antigens isolated from the Leishmania braziliensis complex than with antigens from Leishmania amazonensis (p<0.001). ELISA assays showed a sensitivity range from 60% to 95% with antigens isolated from the Leishmania braziliensis complex. There was marked nonspecific reactivity among serum samples with the use of antigenic fractions binding with concanavalin-A and jacalin from both Leishmania complexes, in comparison with other antigens (p<0.001). The results presented in this study suggest that the use of homologous antigens increases the efficiency of anti-Leishmania immunoglobulin detection, which may be very valuable for diagnostic purposes.

No presente trabalho, foi purificada por cromatografia de afinidade em D-galactose imobilizada em agarose, uma lectina do latex de Synadenium carinatum (ScLL). Essa lectina é uma potente aglutinina para eritrócitos humanos, cuja atividade hemaglutinante foi inibida com 3,0 mM de N acetil-D-galactopiranosidio, 6,3 mM de metil-beta-D-galactopiranosidio ou 50 mM metil-alfa-D-pironosidio ou D-fucose, porém, nenhuma inibição foi evidenciada por L-fucose, revelando uma especificidade anomérica e conformacional da lectina. A análise por SDS-PAGE dessa lectina pareceu ser uma glicoproteína composta por duas cadeias polipeptídicas de aproximadamente 28 e 30 kDa, porém, em cromatografia de exclusão por tamanho sobre Sephadex G100 e em gel nativo apresentou um peso molecular aparente de 120-130 kDa, a qual mostrou ser composta de uma mistura de subunidades de peptídeos de 28 e 30 kDa. Essa lectina manteve-se estável em pH de 6 a 9 e temperatura de 4 a 56ºC. A seqüência N-terninal contem uma região conservada GPN a qual também é observada em outras lectinas de látex de outras Euphorbiaceas ligante de D-galactose.

A lectin from the latex of Synadenium carinatum was purified by affinity chromatography on immobilized-D-galactose-agarose and shown to be a potent agglutinin of human erythrocytes. The haemagglutination of human red cells was inhibited by 3.0 mM N-acetyl-D-galactopyranoside, 6.3 mM methyl-beta-D-galactopyranoside, 50 mM methyl-alpha-D-galactopyranoside and 50 mM D-fucose but not by L-fucose, demonstrating an anomeric and a conformational specificity. According to SDS-PAGE analysis, the lectin appeared to be a glycoprotein composed of two polypeptide chains of ca. 28 and 30 kDa, but size exclusion chromatography (Sephadex G-100) and native PAGE revealed a protein of apparent molecular weight 120 - 130 kDa made up of 28 and 30 kDa subunits. The lectin was stable in the range pH 6 - 9, and 4 - 56ºC. The N-terminal sequence of the 30 kDa subunit contained the conserved consensus sequence GPN observed in other D-galactose-binding lectins found in latex of members of the Euphorbiaceae.