The aim of this work was to evaluate the efficiency of real-time RT-PCR for detection of different isolates of ten important virus species that infect grapevines in Brazil: Grapevine leafroll-associated virus (GLRaV-1, -2, -3 and -5), Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine virus D (GVD), Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV), Grapevine fleck virus (GFkV) and Grapevine fanleaf virus (GFLV). The reactions consisted of individual (simplex) and simultaneous (duplex) virus detections. Thirty six grapevine accessions, regenerated after thermotherapy and tissue culture treatments, have been analysed. All the above-mentioned viruses were sensitively detected in simplex reactions in samples infected with different virus isolates. Specifically to GLRaV-1 it was necessary to mix reagents refered by different sources to achieve the amplification. GVA, GRSPaV, GLRaV-2 and GLRaV-3 combined with GVB, GFLV, GFkV, GVD and GLRaV-5 were accurately detected in duplex trials. It was shown, that real-time RT-PCR (TaqMan) is able to efficiently detect different local virus species and isolates.

Os vírus são capazes de induzir desordens metabólicas e estruturais nas células vegetais, as quais podem variar com a espécie viral e a suscetibilidade da planta. Neste enfoque, videiras (Vitis vinifera) com e sem sintomas de infecção viral, das cvs. Cabernet Franc e Cabernet Sauvignon, em dois vinhedos comerciais, foram avaliadas comparativamente quanto ao potencial fotossintético (fotossíntese de saturação luminosa, radiação de saturação, ponto de compensação de luz, taxa de respiração no escuro, rendimento quântico aparente, clorofilas total, a e b), quanto ao metabolismo de carbono foliar (açúcares solúveis totais e amido) e quanto a qualidade enológica da uva produzida (sólidos solúveis totais - ºBrix, densidade, pH e acidez total titulável no mosto - ATT; intensidade total da cor e índice de polifenóis totais na casca). Nas plantas sintomáticas foram detectados o Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) e o Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) pelo teste ELISA para seis vírus, os quais provocaram reduções significativas na clorofila e no potencial fotossintético, em ambas as cultivares. As folhas de plantas infectadas também apresentaram acúmulos significativos de carboidratos, caracterizando um bloqueio no transporte de carbono desses órgãos. Quanto à qualidade enológica da uva, no momento da colheita as plantas infectadas apresentaram uvas com nível de maturação significativamente menor, considerando todos os parâmetros tecnológicos do mosto (ºBrix, densidade, pH, ATT e polifenóis). De modo geral, destaca-se que estes vírus podem comprometer diretamente a capacidade produtiva e a qualidade da produção destas cultivares.

Viruses may induce metabolic and structural disarray in plant cells to varying degrees depending on viral species and plant susceptibility. With this focus, grapevine plants (Vitis vinifera) cvs. Cabernet Franc and Cabernet Sauvignon, symptomless and showing symptoms of virus-infection, in two commercial vineyards were comparatively analyzed. The parameters were: 1. photosynthetic potential (light-saturated rate of photosynthesis, saturating light intensities, light compensation point, dark respiration rate, apparent quantum yield, chlorophyll a and b); 2. foliar carbon metabolism (total soluble sugars and starch), and 3. enologic quality of the produced grapes (total soluble solids - ºBrix, density, pH and titerable total acidity in the must; total color intensity and total polyphenols in berry skins) were recorded. In symptomatic plants Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) and Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) have been detected by ELISA carried out for six viruses. The virus infections induced significant reductions in chlorophyll content and in photosynthetic potential of both cultivars. Leaves of infected plants also showed significant accumulation of carbohydrates, suggesting a blockage of carbon transport out of these tissues. Concerning the enologic quality and based on technological parameters of the must (ºBrix, density, titerable total acidity and polyphenols), grapes of infected plants showed at harvest a significantly lower level of maturation. These viruses directly affect the productive capacity as well as the quality of the grapes produced by these cultivars.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade de três vírus (Rupestris stem pitting-associated virus - RSPaV, Grapevine leafroll-associated virus 2 - GLRaV-2 e Grapevine fanleaf virus - GFLV) que infectam videiras no Brasil, através da caracterização molecular do gene da proteína capsidial (CP). Foram amplificados fragmentos que compreendem os genes completos da CP de nove isolados de RSPaV (780 pb), seis de GLRaV-2 (597 pb) e três de GFLV (1515 pb) por RT-PCR, utilizando-se oligonucleotídeos específicos para cada espécie viral. Os DNAs amplificados foram clonados e sequenciados. Os isolados de RSPaV foram reunidos em quatro grupos pela análise filogenética das sequências obtidas com valores de identidade de nucleotídeos (nt) que variaram de 81 a 99%. Para GLRaV-2, dois grupos foram definidos a partir das sequências de nt, com valores de identidade que variaram de 88 a 99% e, para GFLV, foram definidos dois grupos, com valores de identidade de nt que variaram de 89 a 98%. Os diferentes isolados das três espécies virais estudadas também foram detectados utilizando-se hibridização com sondas não-radioativas, marcadas com digoxigenina, possibilitando identificar de forma inequívoca as amostras infectadas, independentemente dos isolados virais empregados para síntese das sondas.

The purpose of this study was to evaluate the variability of three viruses (Rupestris stem pitting-associated virus - RSPaV, Grapevine leafroll-associated virus 2 - GLRaV-2 and Grapevine fanleaf virus - GFLV) infecting grapevines in Brazil, through molecular characterization of the coat protein (CP) gene. DNA fragments were amplified comprising the complete CP genes of nine isolates of RSPaV (780 bp), six of GLRaV-2 (597 bp) and three of GFLV (1515 bp) by RT-PCR, using specific primers for each viral species. The amplified DNA fragments were cloned and sequenced. RSPaV isolates were clustered into four groups by phylogenetic analysis of the nucleotide (nt) sequences of the CP gene, showing identity values ranging from 81 to 99%. For GLRaV-2, two groups were defined from nt sequences, with identity values ranging from 88 to 99% and for GFLV, two groups were defined with identity values ranging from 89 to 98%. The isolates of each viral species studied here were detected by non-radioactive probes labeled with digoxigenin, allowing unambiguous identification of infected samples, independent of the isolate used as template for probe synthesis.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade da indexação biológica múltipla de vírus latentes de macieiras em indicadoras lenhosas. O método consistiu na enxertia de cinco espécies de indicadoras e duas borbulhas da cultivar a ser indexada em um único porta-enxerto. Concluiu-se que a eficácia e a sensibilidade do método biológico múltiplo é adequada para a detecção confiável de Apple stem grooving virus (ASGV), Apple stem pitting virus (ASPV) e Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV) em programas de limpeza clonal e certificação de matrizes de fruteiras. A RT-PCR confirmou o diagnóstico biológico de ASPV e ASGV. Entretanto, ACLSV diagnosticado pela indicadora LL-S5 não foi detectado por RT-PCR em três dos nove acessos analisados. O gene de proteína capsídica de ACLSV de um dos acessos estudados foi clonado e sequenciado; a região de pareamento dos iniciadores de PCR foi comparada com dados do Genbank como subsídio à interpretação da não amplificaçãode certos isolados de ACLSV.

This study aimed to evaluate the suitability of a multiple biological indexing method of latent apple viruses. The method consisted of grafting five indicator species and two buds of the plant to be indexed on to one rootstock. Results showed that the sensitivity and efficacy of the MBI is adequate for reliable detection of Apple stem grooving virus, (ASGV), Apple stem pitting virus (ASPV) and Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV) of mother plant stock in certification programs. Sample analysis by RT-PCR confirmed the results of the diagnosis of ASPV and ASGV by multiple biological indexing. However, it did not detect ACLSV diagnosed by LL-S5 in three out of nine analyzed accessions. The coat protein gene of one of the accessions studied was cloned and sequenced. The annealing sites of primers used in unsuccessful amplification attempts were compared with data of the Genbank to explain the non-amplification of certain ACLSV isolates.

Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), a principal espécie viral do complexo do enrolamento da folha da videira (Vitis spp.), causa reduções no rendimento e na qualidade da uva. O gene da proteína capsidial foi amplificado via RT-PCR a partir de RNA total, extraído de folhas de videira infectadas. O fragmento amplificado foi clonado e completamente seqüenciado. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-C. O plasmídeo recombinante foi utilizado para a expressão da proteína capsidial em Escherichia coli BL21:DE3. A proteína capsidial, ligada a uma cauda de 6-His, foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDS-PAGE e Western blot e, após quantificação, foi utilizada para imunizar coelhos. O anti-soro mostrou-se sensível e específico para a detecção do GLRaV-3 em extratos de videira por Western blot e DAS-ELISA, não tendo sido observadas reações inespecíficas ou heterólogas contra outros vírus sorologicamente não relacionados.

Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), the main viral species of the grapevine leafroll complex, causes yield and quality reduction in grapes (Vitis spp.). The coat protein gene was RT-PCR-amplified from total RNA extracted from infected grapevine leaves and the amplified fragment was cloned and completely sequenced. The fragment was subsequently subcloned into the pRSET-C expression vector. The recombinant plasmid was used to transform Escherichia coli BL21:DE3 and express the capsid protein. The coat protein, fused to a 6 His-tag, was purified by affinity chromatography using an Ni-NTA resin. The identity of the purified protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blot. The in vitro-expressed protein was quantified and used for rabbit immunizations. The antiserum was shown to be sensitive and specific for the detection of GLRaV-3 in grapevine extracts in Western blot and DAS-ELISA assays, with no unspecific or heterologous reactions against other non-serologically related viruses being observed.

O enrolamento da folha é uma doença economicamente importante que afeta videiras (Vitis spp.). Nove vírus sorologicamente distintos, Grapevine leafroll-associated virus-1 a -9, estão associados à doença. Este estudo descreve a seqüência do gene da proteína capsidial de quatro isolados do GLRaV-3 encontrados no Vale do Rio São Francisco, Nordeste do Brasil. O RNA viral foi extraído de plantas positivas em ELISA para o GLRaV-3 e o gene da proteína capsidial completo foi amplificado por RT-PCR. As seqüências foram geradas automaticamente e comparadas a seqüências completas do gene da proteína capsidial de isolados Norte-Americano (NY1) e Chineses (Dawanhong Nº;2 e SL10) de GLRaV-3. Os quatro isolados estudados, denominados Pet-1 a 4, exibiram identidades de aminoácidos deduzidos de 98-100% (Pet-1 a 3) e 95% (Pet-4) com os isolados Norte-Americano e Chineses. Um total de dezessete substituições de aminoácidos foi detectado entre os quatro isolados caracterizados em comparação com as seqüências do NY1, Dawanhong No.2 e SL10. Os resultados indicaram a existência de variação natural entre os isolados de GLRaV-3 de videiras, demonstrando também a falta de correlação entre dados de sequência e origem geográfica. Esta variabilidade deve ser considerada quando se selecionam regiões do genoma viral para uma detecção molecular confiável e consistente.

Leafroll is an economically important disease affecting grapevines (Vitis spp.). Nine serologically distinct viruses, Grapevine leafroll-associated virus-1 through 9, are associated with this disease. The present study describes the coat protein gene sequence of four GLRaV-3 isolates occurring in the São Francisco River basin, Northeastern Brazil. The viral RNA was extracted from GLRaV-3 ELISA-positive plants and the complete coat protein gene was amplified by RT-PCR. Sequences were generated automatically and compared to the complete coat protein sequence from North American (NY1) and Chinese (Dawanhong Nº2 and SL10) GLRaV-3 isolates. The four studied isolates, named Pet-1 through 4, showed deduced amino acid identities of 98-100% (Pet-1 through 3) and 95% (Pet-4) with North American and Chinese isolates. A total of seventeen amino acid substitutions was detected among the four characterized isolates in comparison to the NY1, Dawanhong No.2 and SL10 sequences. The results indicated the existence of natural variation among GLRaV-3 isolates from grapevines, also demonstrating a lack of correlation between sequence data and geographic origin. This variability should be considered when selecting regions of the viral genome targeted for reliable and consistent virus molecular detection.

Os viróides são os menores fitopatógenos conhecidos, sendo constituídos de uma molécula de RNA fita simples, circular, com forte estrutura secundária. Possuem genomas que variam entre 246 e 401 nucleotídeos e, por não traduzirem proteínas próprias, são totalmente dependentes da célula hospedeira para sua replicação. São classificados em duas famílias e sete gêneros. O Citrus exocortis viroid (CEVd) pertence ao gênero Pospiviroid, enquanto o Hop stunt viroid (HSVd) é o único membro do gênero Hostuviroid, ambos pertencentes à família Pospiviroidae. Estes patógenos apresentam ampla distribuição mundial e infectam um grande número de hospedeiras. No Brasil, isolados do CEVd e do HSVd foram detectados em citros e videiras. Com o objetivo de caracterizar e estudar a variabilidade genética destes viróides, promoveu-se extração de RNA total de folhas de videira Vitis vinifera 'Cabernet Sauvignon' e V. labrusca 'Niagara Rosada' provenientes de Bento Gonçalves, RS, e RT-PCR com oligonucleotídeos específicos para os cinco viróides já descritos em videira [HSVd, CEVd, Grapevine yellow speckle viroid 1 (GYSVd-1), Grapevine yellow speckle viroid 2 (GYSVd-2) e Australian grapevine viroid (AGVd)]. Amostras de folhas de Citrus medica infectadas pelo CEVd provenientes de São Paulo também foram analisadas. Os fragmentos de DNA amplificados foram eluídos, clonados e seqüenciados. As análises das seqüências revelaram que as amostras de videira estavam duplamente infectadas com o CEVd e HSVd. As análises filogenéticas mostraram que os clones de HSVd de videira aqui caracterizados agruparam-se com outros variantes de videira, formando um grupo separado de um segundo formado por variantes de citros. Já os clones de CEVd de videira agruparam-se com isolados de citros e videira.

Viroids, non-protein-coding small (246-401 nt) circular single-stranded RNAs with autonomous replication, are currently classified into two families. Within the family Pospiviroidae, Citrus exocortis viroid (CEVd) belongs to the genus Pospiviroid while Hop stunt viroid (HSVd) is the single member of the genus Hostuviroid. These pathogens are distributed worldwide and infect a large number of hosts. In Brazil, isolates of CEVd and HSVd have been detected in both citrus and grapevine. To characterize and study the genetic variability of these viroids, total RNA from leaves of grapevine Vitis vinifera 'Cabernet Sauvignon' and V. labrusca 'Niagara Rosada' from Bento Gonçalves, RS, was used as a template for RT-PCR amplification with specific primers for the five viroids described infecting grapevines [HSVd, CEVd, Grapevine yellow speckle viroid 1 (GYSVd-1), Grapevine yellow speckle viroid 2 (GYSVd-2) and Australian grapevine viroid (AGVd)]. Leaf samples of Citrus medica infected with CEVd from São Paulo were also analyzed. The resulting products were separated by agarose gel electrophoresis and DNA fragments of the expected size were eluted, cloned and sequenced. The grapevine samples analyzed were doubly infected by CEVd and HSVd. A phylogenetic analysis showed that the Brazilian grapevine HSVd variants clustered with other grapevine HSVd variants, forming a specific group separated from citrus variants, whereas the Brazilian CEVd variants clustered with other citrus and grapevine variants.

A videira (Vitis spp.) é afetada por diversas viroses, dentre essas, o enrolamento da folha se destaca pela importância econômica. A doença é causada por um complexo formado por até oito vírus [Grapevine leafroll-associated virus (GLRaV) -1 ao -8]. O objetivo desse trabalho foi comparar a variabilidade da extremidade 3' do gene da polimerase de isolados de GLRaV-3, provenientes do Submédio do Vale do Rio São Francisco (Petrolina, PE) com a de outros isolados disponíveis no GenBank, incluindo um isolado da América do Norte e um da região sul do Brasil. O RNA viral foi extraído de três amostras infetadas, reagentes em teste de ELISA, e um fragmento de 340 pb foi amplificado por RT-PCR, utilizando-se oligonucleotídeos para a região do gene da polimerase viral compreendida entre os nucleotídeos 8267 a 8606. Observou-se que os três isolados da região do São Francisco, denominados Pet-1, Pet-2 e Pet-3, apresentaram 98% e 94% de similaridade com o isolado norte-americano (AF037268) com aquele do sul do Brasil (AF438411), respectivamente. A principal variação observada foi uma troca de um aminoácido da posição 2766 (F2766Y), considerando-se o genoma completo. Esses dados preliminares indicam a existência de uma variabilidade natural entre isolados de GLRaV-3 em videiras. Isso pode ser explicado pela propagação vegetativa e pelo longo ciclo da planta associados à propensão ao erro da RNA polimerase dependente de RNA.

Many viral diseases, including leafroll, which is of great economic importance, affect grapevines (Vitis spp.). A complex of eight viruses [Grapevine leafroll-associated virus (GLRaV) -1 to 8] is associated with this disease. The objective of this study was to compare the variability of the 3' terminal region of the polymerase gene of three isolates of GLRaV-3 (Grapevine leafroll-associated virus-3), from Submédio do Vale do Rio São Francisco (Petrolina-PE) with that of other isolates available at the GenBank, including an isolate from North America and another from Southern Brazil. The viral RNA was extracted from three infected ELISA reactive plants and a fragment of 340 bp was amplified, by RT-PCR, using primers that recognize that portion of the polymerase gene found between nucleotides 8267 and 8606. The three isolates from Vale do Rio São Francisco named Pet-1, Pet-2 and Pet-3, showed similarities ranging from 98% and 94%, respectively to the isolates from North America (AF037268) and Southern Brazilian (AF438411). Considering the whole genome, the main variation found was one amino acid change at position 2766 (F2766Y). These preliminary data indicate the existence of a natural variation among GLRaV-3 isolates from grapevines. This could be due to the vegetative propagation and long cycle of the plant, associated with the error-prone nature of RNA-dependent RNA polymerase.

As principais espécies de vírus envolvidas na etiologia do enrolamento da folha da videira (Vitis spp.) são Grapevine leafroll-associated virus 1 e 3 (GLRaV-1 e -3). Neste estudo da variabilidade desses vírus, foram amplificados dois fragmentos de DNA (396 bp do GLRaV-1 e 602 bp do GLRaV-3) por RT-PCR, a partir de RNA total extraído de nervuras e pecíolos de videiras infetadas, utilizando-se dois pares de oligonucleotídeos. Os DNAs amplificados foram clonados e reamplificados, a partir dos clones recombinantes, e comparados quanto às diferenças conformacionais das fitas simples desnaturadas (SSCP). Foram observados dois padrões distintos de perfis eletroforéticos para cada vírus, tendo sido seqüenciado pelo menos um clone viral correspondente a cada padrão. As duas seqüências de nucleotídeos obtidas para o GLRaV-1 apresentaram maior homologia (79,8% e 87,4%) com um isolado australiano e as duas seqüências relativas ao GLRaV-3 exibiram maior homologia (75,1% e 81,8%) com um isolado norte-americano. Os resultados demonstraram a ocorrência de seqüências variantes destes vírus nas videiras analisadas.

The main viral species associated with grapevine (Vitis spp.) leafroll etiology are Grapevine leafroll-associated virus 1 and 3 (GLRaV-1 and -3). To partially evaluate the variability of these viruses, two DNA fragments (396 bp of GLRaV-1 and 602 bp of GLRaV-3) were amplified by RT-PCR using two sets of primers after total RNA extraction from veins and petioles of infected grapevines. The amplified DNA fragments were cloned and the reamplified viral DNAs, obtained from the recombinant clones, were studied with regard to denatured single-strand DNA conformational differences. Two different electrophoretic profiles were observed for each virus species. At least one viral clone representing each mobility profile was sequenced. The two nucleotide sequences obtained for GLRaV-1 showed the highest homologies (79,8% and 87,4%) with an Australian isolate, whereas the two nucleotide sequences of GLRaV-3 exhibited the highest homologies (75,1% and 81,8%) with a North American isolate. These results demonstrated the occurrence of GLRaV-1 and -3 sequence variants infecting the analysed grapevines.

O gene da capa protéica de Apple stem grooving virus (ASGV) foi amplificado por RT-PCR, clonado, seqüenciado e subclonado no plasmídeo pMal-c2. A capa protéica de ASGV foi expressa em Escherichia coli como proteína de fusão contendo um fragmento do gene da proteína de ligação a maltose de E. coli (MBP). Células bacterianas foram rompidas por sonicação e a proteína de fusão ASGVcp/MBP foi purificada por cromatografia de afinidade em resina de amilose. Anti-soros policlonais de coelhos imunizados com a proteína de fusão reagiram especificamente com extratos de maçãs (Malus domestica) cv. Fuji Irradiada e Chenopodium quinoa infetadas com ASGV em diluições de 1:1000 e 1:2000, respectivamente, em ELISA indireto. A proteína de fusão ASGVcp/MBP reagiu positivamente com anticorpos comerciais produzidos contra ASGV em testes de "immunoblotting". A imunogamaglobulina contra ASGVcp/MBP teve desempenho favorável em especificidade e sensibilidade ao vírus. Este método representa um instrumento adicional para a eficiente indexagem de ASGV em material propagativo e básico de maçã e como complemento de métodos biológicos e moleculares.

The coat protein gene of Apple stem grooving virus (ASGV) was amplified by RT-PCR, cloned, sequenced and subcloned in the expression vector pMal-c2. This plasmid was used to transform Escherichia coli BL21c+ competent cells. The ASGV coat protein (cp) was expressed as a fusion protein containing a fragment of E. coli maltose binding protein (MBP). Bacterial cells were disrupted by sonication and the ASGVcp/MBP fusion protein was purified by amylose resin affinity chromatography. Polyclonal antibodies from rabbits immunized with the fusion protein gave specific reactions to ASGV from infected apple (Malus domestica) cv. Fuji Irradiada and Chenopodium quinoa at dilutions of up to 1:1,000 and 1:2,000, respectively, in plate trapped ELISA. The ASGVcp/MBP fusion protein reacted to a commercial antiserum against ASGV in immunoblotting assay. The IgG against ASGVcp/MBP performed favorably in specificity and sensitivity to the virus. This method represents an additional tool for the efficient ASGV-indexing of apple propagative and mother stock materials, and for use in support of biological and molecular techniques.

Rupestris stem pitting associated virus (RSPaV) é o agente causal das "caneluras do tronco de Rupestris" da videira (Vitis spp.). Neste trabalho, um isolado de RSPaV, encontrado em videiras cv. Cabernet Franc no Rio Grande do Sul, foi estudado. O vírus foi detectado biologicamente, por enxertia em videira indicadora cv. Rupestris du Lot, em 26,2% das amostras avaliadas. A seqüência parcial do gene da replicase do RSPaV, isolado sul-brasileiro, com 831 nucleotídeos amplificados por RT-PCR e 276 aminoácidos deduzidos, apresentou maior identidade de nucleotídeos (98,1%) e aminoácidos deduzidos (99,6%), com dois isolados norte-americanos. O RSPaV estudado apresentou baixa homologia (37-41%) com outros vírus do gênero Foveavirus. A maioria das mudas de videira cv. C. Franc infetadas com RSPaV apresentou diminuição no potencial fotossintético (2,68 a 5,12 vezes) e aumento na taxa respiratória no escuro quando comparadas a mudas sadias, salientando os impactos que esse vírus pode proporcionar no potencial produtivo de videiras.

The Rupestris stem-pitting associated virus (RSPaV) is reported to cause stem pitting disease in grapevines (Vitis spp.). This work studies an RSPaV-isolate found infecting grapevine cv. C. Franc in the State of Rio Grande do Sul, Brazil. This isolate was detected biologically, by grafting on Rupestris du Lot grapevine indicator, in 26.2% of the analysed samples. The partial replicase gene sequence of the Southern Brazilian RSPaV isolate, with 831 nucleotides amplified by RT-PCR and 276 deduced amino acids, showed high identities of nucleotides (98.1%) and deduced amino acids (99.6%), with two RSPaV North American isolates. The RSPaV studied showed low homology (37-41%) with other members of the genus Foveavirus. Most of the virus-free rootstocks grafted with RSPaV infected scions showed photosynthetic potential reduction (2.68 to 5.12 times) and dark respiratory rate increase when compared to healthy ones, emphasizing the potential negative impact of this virus on grapevine production.

O enrolamento da folha da videira (Vitis spp.) é uma doença causada por até oito vírus, Grapevine leafroll-associated virus (GLRaV) 1 a 8, sorologicamente distintos e associados ao floema de videiras infetadas. Neste trabalho, foram detectados GLRaV-1 e -3 por DAS-ELISA em 6,9 e 14,7% das amostras analisadas, respectivamente, e provenientes de duas importantes regiões vitícolas do Brasil (Serra Gaúcha e Vale do São Francisco). Os GLRaV-2, -5 e -7 não foram detectados. O GLRaV-3 também foi detectado por dot-ELISA e western blot, observando-se a provável proteína capsidial com cerca de 36 kDa. Um fragmento de 340 pb, compreendendo o terminal 3' do gene da polimerase viral de GLRaV-3, foi amplificado por PCR e seqüenciado. As seqüências de nucleotídeos e aminoácidos deduzidos deste isolado apresentaram alta homologia, 95,0 e 97,1%, respectivamente, com outro isolado de GLRaV-3 (NY1).

Grapevine (Vitis spp.) leafroll is a disease caused by up to eight viruses, denominated Grapevine leafroll-associated viruses (GLRaV- 1 to -8), which are serologically unrelated and associated with phloem tissue. In the present paper, GLRaV-1 and -3 were detected by DAS-ELISA in 6.9 and 14.7% of the samples, respectively, and GLRaV-2, -5 and -7 were not detected in grapes. The analysed samples came from two of the most important grape growing regions in Brazil (Serra Gaúcha and Vale do São Francisco). The GLRaV-3 was also identified by dot-ELISA and western blot, associated with a probable coat protein subunit of approximately 36 kDa. A fragment of 340 bp, comprising the 3' terminal of the viral polymerase gene, was PCR-amplified and sequenced. The nucleotide and deduced amino acid sequences of this isolate showed high homology, 95 and 97.1%, respectively, with another GLRaV-3 isolate (NY1).

Apple stem grooving virus (ASGV) é um dos mais importantes vírus que infetam fruteiras de clima temperado. Este estudo teve por objetivo a caracterização molecular baseada na análise do gene da proteína capsidial do isolado ASGV UV01 encontrado em macieiras (Malus domestica) em Santa Catarina (SC). RNA extraído de plantas infetadas foi usado para a amplificação por RT-PCR, empregando-se iniciadores específicos. O fragmento amplificado de 755 bp foi seqüenciado e comparado com outras seqüências. O gene da proteína capsidial do ASGV UV01 possui 714 nucleotídeos, codificando uma proteína com 237 aminoácidos de Mr prevista de 27 kDa. As seqüências de nucleotídeos e de aminoácidos deduzidos apresentaram, respectivamente, 90,9% e 97,9% de identidade com um isolado japonês de ASGV. Homologias de aminoácidos muito altas (98,7%) também foram verificadas com o Citrus tatter leaf virus (CTLV), um vírus taxonomicamente próximo ao ASGV. Os resultados indicam pequena variabilidade entre isolados de Capillovirus de diferentes regiões. Em um levantamento restrito, plantas adultas usadas como matrizes e mudas introduzidas no país para produção de frutos foram indexadas e mostraram-se infetadas com ASGV (20%), geralmente em complexo com outros vírus (latentes) da macieira (80%).

Apple stem grooving virus (ASGV) is one of the most important viruses infecting fruit trees. This study aimed at the molecular characterization of ASGV infecting apple (Malus domestica) plants in Santa Catarina (SC). RNA extracted from plants infected with isolate UV01 was used as a template for RT-PCR using specific primers. An amplified DNA fragment of 755 bp was sequenced. The coat protein gene of ASGV isolate UV01 contains 714 nucleotides, coding for a protein of 237 amino acids with a predicted Mr of approximately 27 kDa. The nucleotide and the deduced amino acid sequences of the coat protein gene showed identities of 90.9% and 97.9%, respectively, with a Japanese isolate of ASGV. Very high amino acid homologies (98.7%) were also found with Citrus tatter leaf capillovirus (CTLV), a very close relative of ASGV. These results indicate low coat protein gene variability among Capillovirus isolates from distinct regions. In a restricted survey, mother stocks in orchards and plants introduced into the country for large scale fruit production were indexed and shown to be infected by ASGV (20%), usually in a complex with other (latent) apple viruses (80%).