Resumo Nematoides entomopatogênicos (NEP) das famílias Heterorhabditidae e Steinernematidae são amplamente utilizados no controle de insetos-pragas. No Brasil, os estudos relacionados a caracterização e identificação destes entomopatógenos são recentes e escassos. Nesse sentido, o objetivo deste estudo foi isolar NEP de amostras de solos coletadas em diferentes áreas no estado do Paraná, Brasil. Um isolado Heterorhabditis (UEL 08) detectado em amostra de solo em área de pastagem cultivada com braquiária, localizada em Londrina, Paraná, Brasil (23º34´311´´S, 050º58´298´´W), utilizando o método de “inseto-isca” com lagartas de Galleria mellonella. Para a identificação foram realizados estudos de morfometria e identificação molecular a partir da amplificação da região ITS. Algumas diferenças foram encontradas em termos de morfometria em comparação com a descrição original, entretanto, os dados moleculares demonstraram que a sequência obtida para o isolado UEL 08 é idêntica à sequência de referência de H. amazonensis (DQ665222), com a qual apresentou 100% de similaridade. Os estudos das características biológicas de H. amazonensis (UEL 08) revelaram que o isolado tem dois ciclos de vida distintos, um curto (216 h) e outro longo (288 h), sendo que ocorrem duas gerações em ambos os ciclos. O isolado UEL 08 H. amazonensis foi patogénico e virulento sobre os três hospedeiros avaliados. Notadamente, as larvas de G. mellonella e Alphitobius diaperinus foram consideradas mais susceptíveis do que os adultos do percevejo Dichelops (Diacereus) melacanthus, com percentagens de mortalidade de 100%, 85% e 46% de mortalidade, respectivamente. O ensaio de produção in vivo revelou um rendimento médio diário de 3,4 × 103 juvenis infectantes/g de larva hospedeira.

Abstract Entomopathogenic nematodes (EPNs) from Heterorhabditidae and Steinernematidae families are extensively used to control insect pests. In Brazil, however, relatively few studies have identified and characterized these entomopathogens. The objective of this study was to identify and characterize an EPN isolate obtained from soil samples collected in the state of Paraná, Brazil. An isolate (UEL 08) of Heterorhabditis was detected in a soil sample collected from a pasture area cultivated with Brachiaria grass in Londrina, state of Paraná, Brazil (23°34ʹ311ʹʹS, 050°58ʹ298ʹʹW), using the insect-baiting technique with Galleria mellonella larvae as hosts. The nematode was identified through morphometric studies and molecular analyses based on amplification of the rDNA ITS region. Although we identified certain morphometric differences compared with the original description, the molecular data indicated that the ITS sequence obtained for the UEL 08 isolate is identical to the reference sequence of H. amazonensis (DQ665222) and presented 100% similarity. Thus, the findings of our morphological and molecular studies confirmed that the isolated nematode is H. amazonensis, which is the first time this species has been registered in Paraná. Study of the biological characteristics of H. amazonensis (UEL 08) revealed that the isolate has two distinct life cycles – one short (216 h) and the other long (288 h) – and produces two generations in both cycles. We observed that H. amazonensis (UEL 8) was pathogenic and virulent to the three evaluated hosts, although with different virulence against these hosts. The larvae of G. mellonella and Alphitobius diaperinus were more susceptible than adult Dichelops (Diacereus) melacanthus, with 100%, 85%, and 46% mortality, respectively. Furthermore, an in vivo production assay revealed a mean daily yield of 3.4 × 103 infective juveniles/g host larvae.

RESUMO A cochonilha-da-raiz-do-cafeeiro Dysmicoccus texensis (Tinsley) ataca as raízes desta planta, podendo causar sérios danos às plantações e conseqüentes perdas na produção. Os nematóides entomopatogênicos (NEPs) são agentes eficientes no controle de várias pragas encontradas no solo, o que sugere provável eficiência no controle da cochonilha-da-raiz-do-cafeeiro. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo avaliar a patogenicidade de alguns isolados de NEPs à cochonilhada-raíz-do-cafeeiro através de testes de seleção de isolados, determinação da concentração letal máxima (CLM99) e patogenicidade a criptas coletadas no campo. Os isolados Heterorhabditis sp. CCA, Heterorhabditis bacteriophora, Heterorhabditis sp. JPM3.1 e Heterorhabditis sp. JPM3 foram os que apresentaram maior virulência, alcançando valores máximos de mortalidade de 100, 94, 94 e 82%, respectivamente, na maior concentração testada (100 juvenis infectantes (JI)/inseto). A CL99 determinada para Heterorhabditis sp. CCA foi estimada em 530 JI/placa. Valor semelhante foi encontrado para Heterorhabditis sp. JPM3 que teve a CL99 igual a 560 JI/placa. Estimando a concentração por área, o valor obtido para Heterorhabditis sp. CCA e Heterorhabditis sp. JPM3 foi de 28 e 29 JI/cm2, respectivamente. No teste realizado com criptas, ambos os isolados de NEPs foram patogênicos aos insetos.

ABSTRACT The coffee root mealybug Dysmicoccus texensis (Tinsley) attacks the roots of this plant and can cause serious damage to crops, and consequent losses in production. The entomopathogenic nematodes (EPNs) are effective agents in controlling pests found in soil, which suggests a likely effectiveness in controlling the coffee root mealybug. Therefore, this study aimed to evaluate the pathogenicity of some strains of EPNs against the coffee root mealybug through selection tests of isolates, determination of the maximum lethal concentration (LC99) and the pathogenicity of crypts collected in the field. The isolated Heterorhabditis sp. CCA, Heterorhabditis bacteriophora, Heterorhabditis sp. JPM3.1 and Heterorhabditis sp. JPM3 presented higher virulence, reaching maximum mortality values of 100, 94, 94 and 82% respectively at the highest concentration that was tested (100 infective juveniles IJ/insect). The LC99 determined for Heterorhabditis sp. CCA was estimated at 530 IJ/plate. A similar value was found for Heterorhabditis sp. JPM3, which had the LC99 equal to 560 IJ/plate. Estimating the concentration by area, the value obtained for Heterorhabditis sp. CCA and Heterorhabditis sp. JPM3 was 28 and 29 IJ/cm2, respectively. In the test conducted with crypts, both isolated from EPNs were pathogenic to insects.

RESUMO Foi avaliado o uso de diferentes substâncias com potencial conservante no armazenamento dos nematóides entomopatogênicos Steinernema carpocapsae A11 e Heterorhabditis sp. JPM4. Os nematóides foram mantidos em água destilada (testemunha), sendo os demais tratamentos compostos por água adicionada de: Tween 80® (0,1%), etileno glicol (0,1%), glicerina (1%), glicose (1%), CaCO3 (0,1%), Triton® (0,1%), KMnO4 (0,01%) e NaOCl (0,1%), ambos armazenados em diferentes temperaturas. As avaliações foram realizadas aos 30, 60, 90, 120, 150 e 180 dias, por meio de contagens dos juvenis infectantes (JI), sendo determinadas a sua viabilidade e infectividade. Constatou-se que a glicerina agiu como substância conservante na temperatura de 28º C para os dois nematóides testados e também a 16º C para o nematóide S. carpocapsae A11. As demais substâncias usadas, mesmo quando mantiveram os nematóides vivos, não preservaram a infectividade.

ABSTRACT The use of different substances for the storage of the entomopathogenic nematodes Steinernemacarpocapsae A11 and Heterorhabditis sp. JPM4 was evaluated. The nematodes were kept in distilled water (control) and the other treatments were made with water with the addition of: Tween 80® (0.1%), ethylene glycol (0.1%), glycerin (1%), glucose (1%), CaCO3 (0.1%), Triton® (0.1%), KMnO4 (0.01%) and NaOCl (0.1%). The evaluations were made at 30, 60, 90, 120, 150 and 180 days, counting the number of infective juveniles (IJ) and determining their survival and infectivity. It was found that glycerin acted as a preserving substance at the temperature of 28º C for both nematodes and also in 16º C for S. carpocapsae A11. The other substances tested, even when they kept the nematodes alive, did not show this effect in relation to infectivity.